Pared celular y β-glucanos adsorbentes de micotoxinas extraídos de levaduras con propiedades probióticas

PEREYRA CM; ; KELLER KM;; AMINHAUEL C;; ROSA C.A.;; CAVAGLIERI LR,; DALCERO AM.

Congreso; VII Congreso latinoameriano micotoxicología; 2013

UNRC

Pared celular y β-glucanos adsorbentes de micotoxinas extraídos de levaduras con propiedades probióticas Pereyra CM1,2*; Keller KM3; Aminhauel C1; Rosa C.A., Dalcero AM1,2; Cavaglieri LR1,2. 1Departamento de Microbiología e Inmunología, Facultad de Ciencias Exactas, Físico Químicas y Naturales, Universidad Nacional de Río Cuarto. Ruta 36 km 601 (5800) Río Cuarto, Córdoba, Argentina. 2 Miembro del Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), Argentina. 3 Escola de Veterinaria. Departamento de Medicina Veterinaria Preventiva. Universidad Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, Brasil. (*) cpereyra@unrc.edu.ar Las levaduras, principalmente Saccharomyces cerevisiae son actualmente los microorganismos más utilizados para contrarrestar el problema ocasionado por las micotoxinas en alimentos para animales de producción Si bien se ha demostrado la capacidad de adsorción entre la pared de levaduras y varias micotoxinas, la información del mecanismo de micotoxinas vinculante a la pared celular de levaduras es todavía escasa. Sin embargo, existe una correlación entre la cantidad de β-D-glucanos en la pared y la eficacia de la adsorción de algunas micotoxinas. Los objetivos de este estudio fueron extraer la pared celular y la fracción de β-glucanos de cepas probióticas de S. cerevisiae y evaluar su implicancia en la adsorción de aflatoxina B1 (AFB1) y zearalenona (ZEA). Las cepas estudiadas (RC009, RC016, RC012, RC008) fueron inoculadas en medio líquido extracto de levadura-glucosa 50g e incubadas a 25°C a 200 rpm por 48 h. Los tubos fueron centrifugados, el sobrenadante descartado y el pellet fue lavado 3 veces con solución buffer. Para la extracción de la pared se trabajo a 4°C adicionando nuevamente al pellet la solución buffer y perlas de vidrio y en agitación mecánica durante 30 s,. La fracción de pared fue centrifugada y lavada con agua destilada. Para la extracción de la fracción de β-glucanos, se partió de 1 g de pared agregando 100 mL de KOH 1M incubando en agitación durante 20 h a 4°C. Luego se centrifugó, descartando el sobrenadante. La solución de KOH 1M fue adicionada al pellet 2 veces por 2 h para extraer los β-glucanos insolubles en álcali. Las fracciones de pared (1 mg) y β-glucanos (1 mg) de cada cepa fueron evaluadas para determinar la adsorción y desorción de AFB1 (1000 ppb) y ZEA (1000 ppb) a pH 3 y pH 6, utilizando simulador artificial gástrico e intestinal, respectivamente. Los ensayos fueron realizados por duplicado y se hicieron controles positivos de cada toxina en los diferentes pH y controles negativos de cada pared y β-glucanos. La detección y cuantificación de AFB1 y ZEA se realizaron por cromatografía líquida de alta precisión (HPLC). Las paredes de las cuatro cepas adsorbieron AFB1 en concentraciones que variaron entre 34,7 ppb a 74, 4 ppb y entre 63 ppb a 91,5 ppb a pH 3 y pH 6, respectivamente. Los β-glucanos no fueron capaces de adsorber la toxina a pH 3 mientras que a pH 6 adsorbieron entre 67,7 a 108,6 ppb. La desorción de AFB1 fue variable. En relación a la adsorción de ZEA, las paredes fueron capaces de adsorber concentraciones entre 361 a 651 ppb a pH 3, mientras que a pH 6 la adsorción fue de 226 a 256 ppb. La adsorción de ZEA por parte de los β-glucanos fue mayor en todos los casos (de 809 a 1008 ppb) con porcentajes de adsorción de 73,8% a 91,8%, comparados con sus respectivas paredes a pH 3, a excepción de los β-glucanos extraídos de la cepa RC012 (340 ppb). En relación a los ensayos realizados a pH 6 la adsorción fue menor comparado con sus respectivas paredes, los valores de adsorción variaron entre 145 ppb (RC009) a 298 ppb (RC016). En ninguno de los ensayos realizados con las paredes y los β-glucanos para ZEA a pH 3 existió desorción, mientras que a pH 6 la desorción fue de 45,5 a 67,9% para las paredes y de 40 a 81,2% para la fracción de los β-glucanos. Tanto las paredes como la fracción de los β-glucanos fueron capaces de adsorber cantidades importantes de ZEA, demostrando que la adsorción es dependiente de la cepa de S. cerevisiae de donde fueron extraídos, del pH estudiado, además la interacción a pH 3 es un mecanismo irreversible.