Variabilidad poblacional de especies toxicogénicas de Aspergillus mediante el uso de la técnica de Q-PCR y calidad de ensilajes inoculados con aditivos microbianos autóctonos

PELLEGRINO M, ; DOGI C,; POLONI V,; PEREYRA C, ; PIANZZOLA MJ,; SANABRIA A, ; DALCERO AM, ; TORRES A,; CAVAGLIERI L.

Congreso; VII Congreso latinoameriano micotoxicología; 2013

UNRC

Variabilidad poblacional de especies toxicogénicas de Aspergillus mediante el uso de la técnica de Q-PCR y calidad de ensilajes inoculados con aditivos microbianos autóctonos Pellegrino M1,3, Dogi C1,3, Poloni V1,3, Pereyra C1,3, Pianzzola MJ2, Sanabria A2, Dalcero AM1,3, Torres A1,3, Cavaglieri L1,3 lcavaglieri@exa.unrc.edu.ar 1 Departamento Microbiología e Inmunología, Universidad Nacional de Río Cuarto. Ruta 36, km 601, (5800) Río Cuarto, Córdoba, Argentina. 2 Cátedra de Microbiología. Facultad de Química. Universidad de la República, Montevideo, Uruguay 3 Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), Argentina. El ensilaje es una técnica económica y ecológica utilizada para conservar y mejorar la disponibilidad de alimento en épocas críticas de producción. Para mejorar su calidad se aplican aditivos como bacterias lácticas que aseguran su predominio durante la fase de fermentación produciendo una rápida disminución del pH. La aplicación de métodos moleculares basados en DNA, como el real time PCR (Q-PCR) para la detección y cuantificación temprana de hongos productores de toxinas presentes en ensilajes es de suma importancia para prevenir la entrada de las micotoxinas toxinas a la cadena alimentaria. El objetivo de este trabajo fue estudiar a través de métodos rápidos y sensibles la variación en la concentración de hongos toxicogénicos y la calidad de ensilajes de maíz inoculados con aditivos microbianos autóctonos que mejoran las condiciones de conservación de los mismos. Se confeccionaron 28 mini-silos a escala de laboratorio con maíz picado en bolsas de polipropileno de 5 L, que fueron apisonados y el aire extraído con una bomba de vacío para asegurar la anaerobiosis. La apertura se efectuó a los 7, 15, 30, 60, 90 y 120 días para la toma de muestras. Los mini-silos fueron inoculados con las bacterias ácido-lácticas (BAL) L. rhamnosus RC007 y L. plantarum RC009 aisladas a partir de ensilajes (107 UFC/g de materia fresca). De los 28 mini-silos, 14 fueron inoculados con las BAL y 14 fueron utilizados como control, sin inocular. Se determinó la cantidad de ácido láctico presente en cada una de las muestras el cual estuvo incrementado en los grupos inoculados respecto de los no inoculados. Para obtener DNA genómico 0,2 g de ensilaje fueron utilizados en un kit de extracción rápida para plantas (Quiagen) y se determinó la concentración de DNA por espectrofotometría y mediante cuantificación en gel de agarosa. A partir de las muestras se realizó Q-PCR utilizando SYBR Green para identificar y cuantificar las especies Aspergillus fumigatus, A. parasiticus y A. flavus a partir de cebadores específicos para cada especie. Para determinar la concentración de cada una de las especies en las muestras de ensilaje se realizaron curvas con cepas de referencia. Los resultados permitieron obtener curvas patrones para cada especie dentro de los límites normales de detección de la técnica. Si bien la cinética de concentración de estas especies a los tiempos muestreados fue variando, siempre fueron menores en los mini-silos inoculados que en los controles sin inocular. Además, estos datos fueron correspondidos con los recuentos de viables. La calidad del ensilaje, se vio mejorada a través de los niveles de ácido láctico producidos.