Potencial capacidad de adhesión a células epiteliales de cepas de Saccharomyces cerevisiae adsorbentes de micotoxinas

ARMANDO M.R; PIZZOLITTO, R.P.; PEIRANO, S.; SALVANO, M.A.; ESCOBAR F.; SABINI L.I.; DALCERO A.M.; CAVAGLIERI L.R.

Tucumán

Jornada; Jornadas Argentinas de la Sociedad de Biología; 2008

Las micotoxinas son metabolitos tóxicos producidos por hongos presentes en los alimentos. Su presencia en niveles superiores a los tolerables representa una amenaza para la inocuidad de los alimentos y un riesgo importante en salud humana y animal. En los últimos años se  han desarrollado estrategias para la eliminación de las micotoxinas cuya aplicación no ha sido exitosa debido a los altos costos o las dificultades prácticas en el proceso de detoxificación. Una alternativa promisoria es el uso de alimentos funcionales que contienen microorganismos probióticos capaces de ejercer efectos benéficos en el animal que los consume. Saccharomyces cerevisiae se ha suministrado en la alimentación durante varios siglos por sus enormes beneficios ya que proporciona vitaminas del complejo B, minerales, proteínas y constituye una herramienta para la remoción potencial de las micotoxinas en la alimentación animal. La adhesión a células epiteliales es un prerrequisito para persistir temporalmente en el huésped y un mecanismo clave para ejercer su actividad probiótica (Servín 2004). El objetivo del presente trabajo fue determinar la capacidad potencial de cepas de S. cerevisiae para adherirse a células Vero. Las cepas de S. cerevisiae utilizadas en este estudio fueron aisladas del ecosistema de cerdos (alimento, intestino y materia fecal) y evaluadas en su capacidad de detoxificación de aflatoxina B1 y ocratoxina A. El ensayo de adhesión se realizó siguiendo la metodología propuesta por Kumura et al. (2004). Las células Vero (1 x 105 células ml-1) fueron inoculadas en una policubeta conteniendo medio de cultivo adecuado. Las cepas de levadura se cultivaron en caldo YPD a 37°C durante 16 h. Posteriormente, fueron recolectadas y lavadas dos veces con PBS (pH 7) por centrifugación, luego de ajustar la concentración del inóculo a 106 y 107 cél ml-1. Las células de levadura se sembraron en la policubeta conteniendo la monocapa celular y se incubaron durante 90 min a 37°C. Después de la incubación, las monocapas se lavaron 4 veces con PBS, fueron fijadas con metanol y teñidas con solución de Giemsa seguida por el examen microscópico. Cada ensayo de adhesión fue realizado por triplicado. Para cada muestra se contaron 20 campos al azar y la capacidad  de adherencia fue expresada como el número de levaduras adheridas a 100 células Vero. Los resultados indican que la capacidad de adherencia de S. cerevisiae varío entre las cepas. A una concentración de 106 cél ml-1 las cepas demostraron un comportamiento irregular, mientras que a una concentración de 107 cél ml-1 todas mostraron una fuerte capacidad de adherencia a las células Vero. La capacidad de adhesión y la colonización son consideradas como factores que contribuyen a la modulación inmune, exclusión de patógenos, y de esta forma producen un efecto benéfico sobre el huésped. Van der Aa Kühle et al. (2004) informó que cepas S. cerevisiae var. boulardii exhibieron fuerte capacidad de adhesión, resultados que coinciden con este estudio. Hemos observado la adhesión a células Vero del 100 % de las cepas de S. cerevisiae estudiadas. Las cepas RC009, aislada de alimento balanceado, RC012 aislada de intestino y RC017 aislada de materia fecal de cerdo fueron los más adhesivas y no se observó diferencias estadísticamente significativa entre ellas (p <0.0001).