INCIDENCIA DE AFLATOXINA M1 EN LECHE DE TAMBOS DE LA PROVINCIA DE CÓRDOBA, ARGENTINA

VERONICA A ALONSO; PILAR MONGE; ANA DALCERO; LILIA CAVAGLIERI; STELLA CHIACCHIERA

Rio de Janeiro (Brasil)

Congreso; XIII Encuentro Internacional de Micotoxinas; 2008

01 - INCIDENCIA DE AFLATOXINA M1 EN LECHE DE TAMBOS DE LA PROVINCIA DE CÓRDOBA, ARGENTINA. VERONICA A ALONSO1-3, PILAR MONGE1-3; ANA DALCERO2-4; LILIA CAVAGLIERI2-4; STELLA CHIACCHIERA1-4. 1Departamento de Química. Universidad Nacional de Río Cuarto. Ruta 36 Km. 601. (5800) Río Cuarto. Córdoba. Argentina. 2Departamento de Microbiología e Inmunología. Universidad Nacional de Río Cuarto. Ruta 36 Km. 601. (5800) Río Cuarto. Córdoba. Argentina. 3Fellowship of Fondo para la Investigación Científica y Tecnológica (FONCYT). 4Member of Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Tecnológicas (CIC-CONICET) valonso@exa.unrc.edu.ar Abstract. Aflatoxin M1 (AFM1) is a biotransformation product that is detected in milk as a direct result of eating AFB1 contaminated food. It has been classified in Class 2B, as a probable human carcinogen. The present study shows the incidence of natural AFM1 in raw milk samples collected in 48 dairy farms from Villa Maria, Cordoba province, Argentina. The toxin in a significant number of samples even thought at levels below those required by current regulations was found. Palabras claves: AFM1, leche, LC-MS-MS. Introducción. Las aflatoxinas, producidas por especies del género Aspergillus, son potencialmente carcinogénicas, teratogénicas, mutagénicas, causando graves daños en la salud humana y animal (Samson 2000). Estudios de previos demostraron la presencia los principales géneros toxicogénicos (Aspergillus, Penicillium y Fusarium) y sus micotoxinas asociadas en alimentos balanceados para pollos (Dalcero y col. 1998, Magnoli y col. 1999). La aflatoxina B1 (AFB1) aflatoxina M1 (AFM1) son las más tóxica de la familia (IARC, 1993). Esta última es un producto de la biotransformación de AFB1 que se detecta en leche como resultado directo de la ingesta de alimento contaminado (Van Egmond 1989).  La AFM1, que puede ser considerada como un biomarcador de exposición a AFB1, ha sido clasificada dentro de la clase 2B, probable carcinógeno humano (IARC, 1993), siendo la población infantil la más susceptible a sus efectos adversos. La presencia de AFM1 está estrictamente regulada por diversas agencias internacionales. En la Unión Europea el límite para leches destinadas al consumo humano es 0,05 ppb, mientras que la FDA y el MERCOSUR permiten hasta 0,5 ppb para leche fluida (Van Egmond, 1989, FAO 2001, Mercosur/ GMC/Res. Nº 25/02). Objetivos. El objetivo del presente trabajo fue determinar la incidencia natural de AFM1 en muestras de leche desde tanques de 48 tambos provenientes de la cuenca lechera de Villa Maria provincia de Córdoba, Argentina. Materiales y Métodos. Se recolectaron 48 muestras de leche de tanque de tambos pertenecientes a la cuenca lechera de Villa María en la provincia de Córdoba. La extracción de AFM1 de las muestras se realizó mediante columnas de inmunoafinidad para AFM1 (AflaStarTM M1-Immunoaffinity columns Romer Labsâ Austria). La determinación de AFM1 se realizó por HPLC-MS-MS. El límite de cuantificación de la técnica fue de 0.04 ng/ml. Se utilizó un equipo HPLC con una bomba Water Alliance 2685 munido de un auto inyector Water Alliance 2695, con detectores PDA Waters 996 y MS-MS detector Quattro Ultima PT. Se utilizó una columna XBridge™ C18 3.5μm (2.1x100mm), flujo de 0.130 ml/min, fase móvil isocrática compuesta por acetonitrilo:0.1% de ácido fórmico acuoso (30:70). Se inyectaron 50μl de los extractos secos resuspendidos en 1 ml de fase móvil en el sistema cromatógráfico. Se trabajó en modo MRM, temperatura de la columna 22 ºC. Se utilizó modo de ionización ESI positivo, temperatura de desolvatación 350ºC, voltaje de capilar 3,00 kV, flujos del gas del cono y de desolvatación 100 y 700 l/h respectivamente, voltaje de cono 75 V, dwell time 100ms. voltaje de entrada y de salida 9 y 50V respectivamente y energía de colisión 35. Se monitoreó el pico padre de AFM1 329,12 uma y las correspondientes hijas 258,74 y 273,21 uma Resultados y Discusión. Los resultados correspondientes al total de 48 muestras analizadas se muestran en la Figura 1.                                                                                                     Figura 1. Incidencia de AFM1 en leche de tambos de la cuenca lechera Villa María - Córdoba Como puede observarse el 62.5% (30 muestras) fueron positivas a AFM1. Dentro de las muestras que resultaron positivas un 86.6% estuvieron por debajo del límite de cuantificación de la técnica establecido en 0,04 ng/ml. Solo 4 muestras (13.4%) tuvieron concentraciones de AFM1 en un rango de 0.04-0,06ng/ml. Los niveles de AFM1 encontrados se mostraron por debajo de lo exigido por la FDA y el MERCOSUR, aunque dos de las muestras estuvieron por encima de los valores tolerados por la UE.  La evolución de la producción lechera en los últimos años ha seguido una línea de intensificación que conlleva a un cambio en la utilización de los alimentos, evolucionando del simple pastoreo a los sistemas de alimentación única, basados en la formulación de insumos que constituyen la clave de la alimentación del rebaño. Diferentes países han llevado a cabo estudios sobre la incidencia de AFM1 en leche y subproductos (Galvano y col. 1996, Gimeno y col. 2004). Estudios previos realizados en Argentina indicaban contaminaciones de AFM1 en leche inferiores al límite de tolerancia (Lopez y col. 1998 y 2003). La implementación de nuevas prácticas metodológicas y nutricionales que implican el almacenamiento prolongado de las materias primas que componen la ración, la aparición de hongos potencialmente aflatoxicogénicos y la  detección de AFB1 en las mismas,. hizo necesario un muestreo significativo en la cuenca lechera más importante de la provincia de Córdoba, Argentina. Si bien, con las reglamentaciones vigentes, estos resultados indican la aptitud de la leche, la presencia de los hongos productores de AFB1 en los alimentos, está indicando un riesgo potencial. Estos resultados estarían indicando la necesidad de controles sistemáticos que garanticen el monitoreo de AFM1 en la leche y la necesidad de la revisión de las regulaciones actuales que rigen en América y que difieren ampliamente de los requerimientos de la Unión Europea. Agradecimientos: Este trabajo fue subsidiado por SECYT- UNRC, CONICET y  FONCYT-PICTO. Bibliografía: Dalcero A., Magnoli C., Luna M., Ancasi G., Reynoso M.M., Chiacchiera S., Miazzo R., Palacio G. 1998. Mycopathologia 141: 37-43 FAO, WHO Food Additives series: 47. 2001. Galvano F., Galofaro V., Galvano G. 1996. J. Food Prot. 59: 1076-1090. Gimeno, A. 2004, Alimentação Animal  49, pp. 32-44.  IARC, 1993, Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risk to Humans, vol. 56, 245-395.. World Health Organisation, Lyon López C.E., Ramos L.L., Ramadán S.S., Blacio L.C. 2003. Food Control 14: 31-34. Magnoli C, Saenz M., Ferrero S., Chiacchiera S.M., Dalcero A. 1999. Mycopathologia 145: 35-41. Samson R.A., Hoekstra E.S., Frisvad J.C., Filtenborg O. 2000. Introduction to food- and airborne fungi. The Netherlands: Centraalbureau Voorschimmelculturs. Utrecht, Ponson and Looyen, Wageningen Press. Van Egmond H.P. 1989. Introduction in mycotoxins in dairy products. London: Elsevier Applied Science. pp. 1-10.