LA TREHALOSA COMO POTENCIAL AGENTE DE FIJACIÓN DE ORIGEN NATURAL EN HÍGADO DE RATA

GUTIERREZ AYESTA CECILIA; VIVIANA SORRIVAS; CARINA CANO

Cartagena de Indiasº

Congreso; 12th Inter-American Microscopy Congress CIASEM 2013,; 2013

Asociación Colombiana de Microscopía

TITULO DEL TRABAJO LA TREHALOSA COMO POTENCIAL AGENTE DE FIJACIÓN DE ORIGEN NATURAL EN HÍGADO DE RATA RESUMEN DEL TRABAJO OBJETIVO Este trabajo, continuación de una aplicación en tejido vegetal [1], tiene como objetivo el estudio de la preservación de un tejido animal empleando soluciones de trehalosa de diferente concentración como agente de fijación, en reemplazo de las tradicionales soluciones usadas en microscopía electrónica [2]. METODOS El tejido hepático de una rata adulta macho fue extraído, segmentado en pequeños trozos y sumergido en distintas soluciones de trehalosa (T9531-10G, Sigma-Aldrich): 1%, 4%, 10% y 30% (p/v) en agua destilada y 4% (p/v) en buffer fosfato (72 hs, 4 ºC). Paralelamente se efectuó un protocolo control, empleando para la fijación glutaraldehído 2,5% (p/v) en buffer fosfato y tetróxido de osmio 2% (p/v) en agua destilada. En todos los casos la deshidratación se realizó mediante un gradiente de alcohol etílico (25, 50, 75 y 100%, v/v) (30 min) y un gradiente de acetona (50 y 100%, v/v) a temperatura ambiente (30 min). Seguidamente se dividieron las muestras, procesándolas para ser observadas por SEM o por TEM. Las imágenes fueron adquiridas mediante un SEM (LEO EVO 40X VP, 2003) a 7 kV y un TEM (JEOL 100 CXII, 1983) a 80 kV. RESULTADOS La morfología superficial de los hepatocitos observada por SEM para dos de las cinco soluciones empleadas fue comparable con el protocolo control. Las microfotografías adquiridas por TEM mostraron zonas donde se mantuvo  la integridad de membrana. CONCLUSIONES El empleo de trehalosa constituye una metodología alternativa en reemplazo de soluciones fijadoras para realizar estudios en microscopía electrónica en hepatocitos murinos. La perspectiva de su utilización como agente fijador aparenta ser promisoria, siendo su principal ventaja el uso de una sustancia no peligrosa. Sin embargo, es necesaria la realización de ensayos que emulen el mecanismo natural presente en numerosos organismos (animales y vegetales) [3], utilizando transportadores de trehalosa (tret1) y proteínas LEA (Late Embryogenesis Abundant) cuya  acción sinérgica ha sido demostrada [4].   BIBLIOGRAFIA 1. Gutiérrez-Ayesta C. , C. A. C. Cano y V. Sorrivas. Acta Microscópica (2012) 21:A, 135-136. 2. Hayat M. A. Principles and techniques of electron microscopy. (2002) 4ª Ed., Cambridge. 3. Hand S., M. Menze, M. Toner, L. Boswell y D. Moore. Annu. Rev. Physiol. (2011) 73: 115-134. 4. Goyal K., L. J. Walton y A. Tunnacliffe. Biochem. J. (2005) 388: 151-157.   Palabras clave: Trehalosa, fijación, hepatocitos, microscopía electrónica. CARGA DE IMÁGENES