EFECTO DE LA TOLERANCIA A LA DESECACIÓN Y PERFORMANCE DE PROTOCOLOS DE CRIOPRESERVACIÓN EN LA VIABILIDAD DE SEMILLAS CitrusLimon L. Burm cv. Eureka

ORJUELA PALACIO JULIANA; GRAIVER NATALIA; SANTOS M.V.; ZARITZKY NOEMI.

LA PLATA

Jornada; QUINTAS JORNADAS DE INVESTIGACIÓN, TRANSFERENCIA y EXTENSIÓN de la FACULTAD DE INGENIERÍA, UNLP; 2019

Facultad de Ingeniería, Universidad Nacional de La Plata

Argentina es uno de los países con mayor producción de cítricos a nivel mundial y se ubica en 2018 entre los 10 mayores productores y exportadores de limón. Citrus limon L. Burm cv. Eureka es una de las variedades más cultivadas en el país siendo su germoplasma un recurso estratégico para Argentina. Las semillas intermedias como las de la especie Citrus son aquellas que toleran rangos específicos de desecación, dependiendo estos rangos de cada especie y variedad de semilla intermedia. Por esta razón las semillas intermedias deben criopreservarse en nitrógeno líquido (NL) habiendo alcanzado previamente humedades especificas de manera tal que el recurso genético esté disponible para futuras aplicaciones biotecnológicas.Existen diferencias en la viabilidad de las semillas de acuerdo a las velocidades de enfriamiento al sumergir las muestras en NL debido a la formación de hielo y durante su calentamiento debido a la presencia de transiciones térmicas del agua/hielo y lípidos. Resulta fundamental entonces analizar tanto la tolerancia a la desecación de semillas de Citrus limón L. Burm cv. Eureka como el proceso de criopreservación. Para ello se sometieron semillas a 8 condiciones de desecación en equilibrio (rango entre 11-85 % de humedad relativa, %HR) a 20 ºC y un secado en sílica gel hasta alcanzar 5 % de humedad (b.h: base húmeda) bajo condición de no-equilibrio. Se evaluó la viabilidad mediante el ensayo de germinación en arena (%G: % germinación) y la prueba de tetrazolio. Las semillas presentaron una tolerancia a la desecación adecuada con valores de %G ≥ 80 en todo el rango de %HR y contenidos finales de agua entre 9.8-25.1 %H (b.h), sin embargo, las semillas desecadas hasta un 5 %H (b.h) disminuyeron significativamente su viabilidad (%G=66.7), confirmando que la especie C. limón cv. Eureka corresponde a una categoría intermedia. Se analizó y modeló la isoterma de sorción utilizando el modelo de D'Arcy & Watt. Las transiciones de fusión de lípidos y de agua en las semillas se analizaron utilizando calorimetría diferencial de barrido (DSC). Se analizó la performance de dos protocolos de criopreservación en NL: i) convencional: las semillas se colocaron en crioviales de polipropileno cerrados (P1) y ii) ultrarrápido: las semillas fueron recubiertas con una capa de aluminio y colocadas en crioviales de polipropileno perforados (P2). Las velocidades de congelación y calentamiento fueron 500 % más rápidas para el protocolo P2 respecto de P1. Para ambos protocolos el valor máximo de viabilidad (%G=83.3) se presentó en semillas con aw= 0.64. El %G disminuyó para semillas con aw ≥ 0.8 y aw 0.05). La formación de hielo intracelular fue responsable de la pérdida de viabilidad a altos valores de aw, mientras que la disminución de la viabilidad a bajas aw se asocia con las transiciones térmicas de los lípidos presentes en las semillas. El P2 presentó una mejor performance comparado con P1 dado que las velocidades de congelación/calentamiento son apreciablemente mayores, reduciendo los efectos negativos de las transiciones térmicas de los compuestos lipídicos y del agua, logrando mantener una mayor viabilidad de las semillas. El uso de P2 permite ampliar el rango de desecación entre 0.54