Herramienta molecular para la identificación de levaduras productoras de astaxantina (Phaffia spp.)

COLABELLA FERNANDO; LIBKIND DIEGO

San Carlos de Bariloche

Congreso; XLIII Congreso Argentino de Genética, IV Reunión Regional SAG ? La Pampa y Patagonia; 2014

Sociedad Argentina de Genética (SAG)

Recientemente se ha encontrado que la distribución natural de Phaffia rhodozyma y su diversidad genética es mucho mayor de lo que se creía. Esta levadura se explota biotecnológicamente por su exclusiva capacidad de producir el pigmento carotenoide astaxantina de aplicación en acuicultura, además del protector solar micosporina-glutaminol-glucósido. Se dificulta obtener nuevos aislamientos de Phaffia por su baja abundancia y la presencia de otras levaduras de apariencia similar y filogenéticamente próximas. Nuestro objetivo fue generar un cebador específico que permita identificar en forma rápida y precisa todos los linajes del género Phaffia y excluir a las especies relacionadas con las cuales co-habita. Para esto se diseñó un cebador de 20 nt (PhR) para ser usado en combinación con los cebadores universales ITS3 y NL4, en una amplificación multiplex. Estos cebadores hibridan en la región conservada ITS o D1D2 del ADN ribosomal, generando amplicones de diferentes tamaños (643 pb ITS3-PhR; 1155 pb ITS3-NL4). Se evaluó esta herramienta con siete cepas de Phaffia representativas de todos los clados reportados y dos especies del género Cystofilobasidium (control negativo). A pesar de su gran diversidad genética, fue posible detectar el amplicón específico para todas las cepas evaluadas, incluso dos posibles especies nuevas del género Phaffia. Para las especies control solo se observó el amplicón de 1155 pb. Esto evidencia que el método propuesto presenta la sensibilidad y especificidad requerida para la identificación precisa de aislamientos de levaduras del género Phaffia.