Análisis metabolómico del modo de acción del Benznidazole en Trypanosoma cruzi

TROCHINE A; CREEK D; FARAL-TELLO P; BARRETT MP; ROBELLO C

Rosario

Congreso; XXVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2013

Sociedad Argentina de Protoozología

El Benznidazole (Bzn) es utilizado en la actualidad como tratamiento de primera línea contra la enfermedad de Chagas, causada por el protozoo parásito Trypanosoma cruzi. Para aportar al conocimiento del modo de acción del Bzn, que aún hoy no está completamente elucidado, se utilizó una aproximación metabolómica basada en espectrometría de masas (MS). Para esto, metabolitos de epimastigotes se obtuvieron por extracción con cloroformo:metanol:agua 1:3:1 y luego se separaron por cromatografía HILIC acoplada a MS de alta precisión en un Orbitrap. Los datos de masas y tiempo de retención permitieron identificar cerca de 1000 compuestos de entre 70 y 1400 Da, cuyas intensidades se compararon en parásitos tratados con Bzn (20 y 50 µM) y sin tratar. El metaboloma de los parásitos tratados se vio mínimamente alterado, con disminuciones significativas de los valores de  tripanotión y cisteína luego del tratamiento, pero con la aparición de un gran número de metabolitos derivados del Bzn. Entre estos compuestos se detectaron productos de reducción, fragmentos, y aductos covalentes con los tioles celulares de bajo peso molecular mayoritarios, incluyendo tripanotión, glutatión y Ovotiol A, entre otros. Estos aductos se formarían por unión de los tioles a los carbonos 4 ó 5 del anillo imidazol. Muchos productos reducidos detectados coinciden con los obtenidos por otros in vitro por acción de la nitroreductasa TcNTRI, confirmando así la relevancia de esta enzima en la reducción y toxicidad del Bzn in vivo. Sin embargo, no se encontraron aductos covalentes con glioxal, un metabolito detectado como producto de esta enzima. En suma, los datos obtenidos nos permiten postular que la capacidad de unir tioles que tienen los metabolitos reducidos del Bzn tendría un rol preponderante en la acción tóxica de la droga sobre Trypanosoma cruzi, tanto por su unión a los tioles de bajo peso molecular como por su posible unión a cisteínas presentes en proteínas. Financiado por FP7 Unión Europea.