Detección del aumento de nitrotirosina asociada al daño oxidativo en la retina luego de iluminación continua.

SANCHEZ DE BUSTAMANTE J., MANTA LLOPART N., SOLIÑO M., LÓPEZ EM., LÓPEZ-COSTA JJ.

Córdoba

Congreso; Reunión Anual de la Asociación de Investigación en Visión y Oftalmología.; 2010

Asociación de investigación en Visión y Oftalmología (AIVO).

La iluminación continua (IC) de la retina produce la degeneración de los fotorreceptores debido al daño oxidativo. En estudios previos demostramos la producción de NO durante la IC por Resonancia Paramagnética Electrónica, dando la máxima señal a las 24 hs en coincidencia con el pico en la expresión de la iNOS revelado por Western Blot. La microscopía electrónica mostró la presencia de apoptosis en la capa nuclear externa a los 2 y 5 días de IC. Como el NO puede ser neurotóxico, su aumento en la retina podría ser uno de los radicales libres responsables de la degeneración observada durante la IC. Objetivo: Determinar la presencia del efecto oxidativo del NO en el tejido mediante la demostración de la nitrosilación de proteínas por inmunocitoquímica empleando un anticuerpo anti-nitrotirosina (Ntir) (Rodrigo et al, 2001). Métodos: Se emplearon ratas Sprague Dawley controles y otras sometidas a IC (12000 lux) durante 1, 2, 5 y 7 días. Los ojos de las ratas controles (CTL) e iluminadas fueron fijados por inmersión en paraformaldehído al 4 %. Las secciones de los ojos fueron procesadas mediante la técnica inmunocitoquímica de IF/PAP empleando un anticuerpo anti-ntir y  contrateñidas con DAPI. Resultados: En animales CTL se observó inmunoreactividad para Ntir en el las capas nuclear interna (CNI) y de células ganglionares (CG). Luego de la iluminación continua fue posible encontrar un aumento de la nitrosilación encontrándose reactividad en la capa nuclear externa (CNE) y también en las capas CNI y CG. Conclusiones: Los resultados obtenidos permiten concluir que el aumento de NO durante la IC produce un incremento de la nitrosilación de proteínas en la retina precediendo al daño morfológico previamente reportado. Postulamos que la administración de inhibidores de la síntesis de NO podría proteger del daño retiniano inducido por IC (Subsidiado por UBACYT M040).