GluN2A knockdown up-regulates synaptic protein in mature primary neuronal cultures

VAZQUEZ, CECILIA; ACUTAIN, M. FLORENCIA; BAEZ, MARÍA VERÓNICA; JERUSALINSKY, DIANA ALICIA

CABA

Workshop; Workshop de Biología Celular y Molecular del ARN; 2018

Los NMDAR son receptorespostsinápticos transmembrana que han sido involucrados en procesos deplasticidad sináptica, aprendizaje y memoria. Están compuestos por dossubunidades obligatorias GluN1, y dos regulatorias: GluN2 (A-D) o GluN3 (A-B).En hipocampo y otras estructuras relacionadas con memoria se ha observadoprincipalmente la expresión de GluN2A-B como subunidades regulatorias; siendo GluN2Acaracterística de sinapsis maduras, y GluN2B de sinapsis inmaduras. Paracomprender el rol que tiene GluN2A durante la adquisición de un nuevoaprendizaje, construimos dos vectores AAV-eGFP: uno de ellos codifica un shRNAanti GluN2A (AAVsh2A), y el otro con una secuencia scramble como control(AAVshSc). Cultivos primarios de neuronas fueron transfectados con dichosvectores, y en ellos se analizó la especificidad del silenciamiento de GluN2A,observando mediante qPCR una disminución de su ARNm únicamente en los cultivosinfectados con AAVsh2A. Esta reducción en la expresión de GluN2Ainteresantemente fue acompañada por una disminución a nivel proteico de GluN1.Por otro lado, al estudiar el efecto sobre la expresión de proteínas sinápticasse observó un aumento de Syn-1 y PSD95 en los cultivos donde GluN2A había sidosilenciada. Estos resultados sugieren que la disminución de GluN2A aunque noaltera la expresión de las subunidades del NMDAR a nivel transcripcional,podría activar mecanismos regulatorios postranscripcionales que modifican elnivel proteico de GluN1; induciendo además un incremento en las proteínassinápticas.