Reactive gliosis, neuronal death and Light neurofilament (Nf-68kD) overexpression in a model of temporary lobe epilepsy by plocarpine.

ROSSI AR; ZUÑIGA Y; ANGELO MF; LAZAROWSKI A; RAMOS AJ

Cartagena, Colombia

Congreso; VI Congreso Latinoamericano de Epilepsia; 2010

Gliosis reactiva, muerte neuronal y sobrexpresión de neurofilamentos livianos (Nf-68KDa) en un modelo de epilepsia del lóbulo temporal por pilocarpina Reactive gliosis, neuronal death and light neurofilament (Nf-68KDa) overexpression in a model of temporary lobe epilepsy by pilocarpine Rossi AR1, Zuñiga Y1,2, Angelo MF1, Lazarowski A1,3, Ramos AJ1 1Instituto de Biologia Celular -Fac. Medicina- Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina, 2Universidad Nacional de Colombia, Bogota, Colombia, 3Universidad de Buenos Aires - Facultad de Farmacia y Bioquimica, Buenos Aires, Argentina Objetivo: Estudiar la respuesta astroglial, la muerte neuronal, la expresión de Nf-68KDa -asociados con fenómenos plásticos de reconexión neuronal- y del factor de transcripción HIF-1alfa en un modelo experimental de epilepsia del lóbulo temporal (TLE) evaluando el nivel de expresión de estos marcadores en función del estadio en la escala de Racine alcanzado por los animales. Método: Ratas macho cepa Wistar fueron separadas en 2 grupos: un grupo (PILO) recibió LiCl 3 mEq/Kg (ip) y a las 20hs recibió pilocarpina 35 mg/Kg (ip), otro grupo (control) recibió LiCl y solución salina. Aproximadamente 20 min post-inyección los animales PILO desarrollaron crisis que se evaluaron según la escala de Racine. Luego de 90 min, todos los animales recibieron diazepam 10 mg/kg. Tres dias después, los animales fueron fijados por perfusion intracardiaca y se obtuvieron secciones de tejido para inmunohistoquimica (GFAP, Nf-68KDa, HIF-1alfa) o FluoroJB. Resultados: Gliosis reactiva, con astrocitos hipertrofiados y aumento de la expresión de GFAP se encontró en el grupo PILO. La intensidad de la gliosis reactiva y de la muerte neuronal aumento siguiendo el estadio alcanzado por cada animal en la escala de Racine. Nf-68KDa resultaron sobreexpresados en pequeños focos neuronales en animales de estadios Racine 1-2; la sobreexpresión fue masiva en estadios 4-5. La expresión de HIF-1alfa se verifico en el grupo PILO. Conclusion: Mayores estadios de Racine determinaron mayor gliosis reactiva, inflamacion y muerte neuronal; pero probablemente tambien incrementaron la plasticidad neuronal. HIF-1alfa aumento en todos los estadios. Subsidado por ANPCYT, CONICET PIP1728, IBRO Purpose: To study the astroglial response, neuronal death, the neuronal plasticity-associated Nf68 KDa expression and the abundance of transcription factor HIF-1alpha in a model of temporary lobe epilepsy (TLE). To relate the expression level of these markers with the stage of Racine scale reached by the animals. Methods: Male Wistar rats were divided in two groups: PILO group received LiCl 3 mEq/Kg (ip) and 20h later received pilocarpine 35 mg/Kg (ip), control group received LiCl and saline solution. Approximately 20 min after injections, PILO group animals developed epileptic seizures that were evaluated by Racine scale. 90 min later, all animals received 10 mg/kg diazepam. Three days later, animals were fixed by perfussion and tissue sections for immunohistochemistry (GFAP, Nf-68KDa, HIF-1alfa) or Fluoro JB staining were obtained. Results: Reactive gliosis with GFAP+ hypertrophied astrocytes, increased GFAP expression and neuronal death were found in PILO group. The intensity of reactive gliosis and the amount of degenerated neurons followed the seizures stage by Racine. Nf-68KDa were overexpressed in small neuronal groups in animals from Racine stages 1-2 and the expression was massive in stages 4-5. HIF-1alfa expression was verified in PILO group. Conclusions: Higher Racine stages determine larger reactive gliosis, brain inflammation, neuronal death but also probably increased neuronal plasticity. The abundance of transcription factor HIF-1alfa increases in all stages. Work supported by grants: ANPCYT, CONICET PIP1728, IBRO