EFECTO DE LA ALOPREGNENOLONA SOBRE LA ASTROGLIOSIS INDUCIDA POR HIPOXIA EN CULTIVOS ORGANOT�PICOS DE ESTRIADO E HIPOCAMPO.

M S KRUSE, J BARUTTA , V BOTI , M REY , G SARACENO , F CAPANI , H COIRINI 1 2

SAIC2008

Congreso; SAIC2008; 2008

EFECTO DE LA ALOPREGNENOLONA SOBRE LA ASTROGLIOSIS INDUCIDA POR HIPOXIA EN CULTIVOS ORGANOT�PICOS DE ESTRIADO E HIPOCAMPO. M S Kruse 1 , J Barutta 1 , V Boti 1 2 , M Rey 1 , G Saraceno 2 , F Capani 2 , H Coirini 1 2 , 1Laboratorio De Neurobiolog�a Ibyme-conicet.2Laboratorio Neurobiolog�a Dept. Bioqu�mica Humana Fmed-uba. Nuevas evidencias indican que los neuroesteroides actúan durante el desarrollo confiriendo neuroprotección al neonato ante episodios de asfixia. En este trabajo estudiamos posibles efectos protectores de alopregnenolona (Alo) ante una hipoxia utilizando cultivos organotípicos de estriado (St) e hipocampo (Hc). Los cultivos fueron obtenidos de cerebro de ratas Sprague Dawley  de 3-5 días de vida, según el protocolo de Stoppini con modificaciones (Cereb cortex 13:11, 2003). Luego de 6 días, los cultivos fueron expuestos durante 24h a diferentes dosis de Alo (0,5nM; 50nM y 5µM) para ser entonces sujetos a hipoxia durante 1h usando una cámara anaeróbica (Billups-Rothenberg, Inc.). Los tejidos fueron luego mantenidos a 37ºC con 5% O2 -95% CO2 por 24h. La viabilidad celular se evaluó determinando lactato deshidrogenasa (LDH) en el medio. Se utilizó la técnica de NADPH diaforasa  para evaluar la óxido nítrico sintasa, y la expresión de GFAP se realizó por técnicas de inmunocitoquímica (IC) y western blot (WB). Luego de 1h de hipoxia todos los cultivos presentaron un aumento LDH que fue mayor y significativo a las 24h post-hipoxia (St=140%, Hc=180% p<0.05). No se observaron diferencias entre los cultivos que fueron pre-tratados con Alo o con vehículo. La hipoxia produjo un aumento en las neuronas positivas para NADPH en St (38%) pero no en Hc (p<0.05). Ensayos de IC analizados con microscopía confocal mostraron un aumento de la señal de GFAP 24h después de la hipoxia. Mediante WB fueron confirmados estos resultados (St=183%, Hc=186%;  p<0.005).  El pretratamiento con Alo provocó una disminución de la señal de GFAP que fue dosis dependiente (50nM y 5µM) en ambos tejidos siendo significativo en el hipocampo (p<0.01). Conclusión: Los cultivos organotípicos son un buen modelo para estudiar los efectos de hipoxia in vitro. 24h de pre-tratamiento con 5µM de Alo no modifica la viabilidad neuronal pero previene la astrogliosis provocada por hipoxia (PIP5349 UBACYT M020 y PICT727).