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JU 0320982 - ESTUDIO DE CAMBIOS ESTRUCTURALES Y FUNCIONALES DE UNA PROTEÍNAEXPUESTA A ÁCIDOS BILIARESIntroducción y Objetivos: Los ácidos biliares (AB) se sintetizan en hígado a partir de colesterol sérico y son liberados a intestino luego de una ingesta rica en lípidos para colaborar con su emulsificación y absorción.Además, los AB representan uno de los principales factores que regulan la composición de la microbiota intestinal. Sin embargo, en la actualidad el mecanismo por el cual estos compuestos limitan el crecimiento bacteriano es en gran parte desconocido. Por ello, en este trabajo evaluamos el efecto del agregado de AB conjugados y libres sobre una proteína modelo con el objeto de profundizar en el conocimiento de su mecanismo de acción antimicrobiano.Materiales y Métodos: Para ello la enzima amilasa fue expuesta a dos concentraciones (7 y 10 mM) de ácido taurodexicólico (ATDC) y ácido deoxicólico (ADC). Para evaluar la naturaleza de la interacción entre la proteínas y los AB se realizaron estudios de espectroscopia UV-visible e infraroja (FTIR), microscopía electrónica, DLS, cálculos de docking molecular y medida de actividad enzimática.Resultados: Mediante espectroscopia UV-visible se observaron cambios en la intensidad de la banda a 280 nm (correspondiente a la proteína), la cual se atenúa de manera significativa (p?0,05) y dependiente de la concentración, en presencia de ambos AB, sugiriendo una interacción con la enzima. Mediante FTIR se observaron cambios en la proporción de hélices alfa con aparición de estructuras desordenadas, efecto que fue más evidente en presencia de ADC. Los cálculos de docking molecular indican que el ATDC interactúa con un residuo de TYR304 en la periferia de la proteina mediante puente hidrogeno, pero no ingresa en el sitio activo de la enzima. Por el contrario, la interacción del ADC involucraría residuos que si intervienen en la actividad enzimática. Empleando microscopía electrónica se observaron cambios conformacionales y agregación de laproteína expuesta a ambos AB. Estos resultados fueron corroborados empleando DLS. Por último, se evaluó si estas alteraciones estructurales afectaban la función de la enzima obervándose pérdida del 40 y 50% de la actividad amilasa en presencia de ADC 7 y 10 mM, respectivamente, sin efectos con el agregado de la especie conjugada (ATDC).Conclusiones: Nuestros resultados indican que los AB provocan cambios estructurales en una proteína modelo que afectan su función. El efecto depende tanto de la naturaleza de los Compuestos en estudio como de su concentración. Estos hallazgos nos ayudan a profundizar en la comprensión de los mecanismos de acción antimicrobianos de los AB.

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