Desarrollo de una matriz cromatográfica de afinidad para la purificación de la aglutinina de germen de trigo WGA

BAIELI FERNANDA; URTASUN NICOLÁS; M.V. MIRANDA; CASCONE O.; FEDERICO WOLMAN

Congreso; SAFYBI 2011; 2011

Las lectinas son proteínas de origen no inmune presentes en plantas y animales. Tienen la particularidad de interaccionar de manera selectiva con hidratos de carbono libres o asociados a proteínas y por lo tanto, tienen la capacidad de aglutinar eritrocitos. La aglutinina de germen de trigo (WGA) es una lectina de aproximadamente 35 kDa que a pH ácido se disocia en dos subunidades idénticas de 17 kDa. Tiene reconocimiento específico por el ácido N-acetil neuramínico y por N-acetil glucosamina. Al ser una proteína estructuralmente compleja con elevado contenido de cisteína, su expresión por técnicas recombinantes es dificultosa, por lo que las metodologías extractivas a partir del germen de trigo siguen siendo la estrategia dominante para su obtención. La WGA es una proteína de alto valor agregado con un mercado creciente debido a sus múltiples usos para la purificación y el estudio de glicoconjugados. El quitosano es un polímero lineal compuesto por unidades de N-acetil glucosamina y glucosamina que se obtiene por desacetilación de la quitina, siendo la quitina el principal constituyente del exoesqueleto de insectos y crustáceos. El quitosano es un polímero barato, abundantemente distribuido en la naturaleza y de fácil obtención, es biodegradable, biocompatible y ambientalmente seguro. Por estas propiedades resulta interesante su utilización como material cromatográfico. Debido a la presencia de grupos amino primarios libres, el quitosano es hidrosoluble en condiciones de pH ácido mientras que es insoluble a pH alcalino. Uno de los desafíos del downstream processing es la posibilidad de contar con matrices que posibiliten purificar bioproductos a partir de muestras complejas en pocas etapas y con bajo costo. En este sentido en el presente trabajo se sintetizaron mini esferas de quitosano -cuya resistencia mecánica fue incrementada por entrecruzamiento con epiclorhidrina- con el objeto de purificar en una única etapa la WGA a partir de extractos de germen de trigo.