DESARROLLO DE UN SISTEMA DE CUANTIFICACIÓN DE ADN HUMANO Y DETECCION DE ADN MASCULINO EN SIMULTÁNEO MEDIANTE PCR?RT SEGUIDA DE DESNATURALIZACIÓN TÉRMICA DE ALTA RESOLUCIÓN

GINART SANTIAGO; SALA A

La Plata

Congreso; XXIII JORNADAS DE JÓVENES INVESTIGADORES ASOCIACIÓN DE UNIVERSIDADES GRUPO MONTEVIDEO (AUGM; 2015

ASOCIACIÓN DE UNIVERSIDADES GRUPO MONTEVIDEO

La cuantificación de ADN es uno de los factores másimportantes que determina el  éxito ycalidad de una reacción posterior de PCR, tanto para técnicas de diagnósticomolecular como para identificación forense. En el área de la genética forense,la detección de ADN masculino es relevante en evidencias provenientes de hechosdelictivos  determinando la estrategia detrabajo posterior. El objetivo de nuestro trabajo fue el desarrollo de una técnica decuantificación de ADN humano y sexado de muestras, que combine el empleo de unsistema de detección de bajo costo con PCR en Tiempo Real (PCR RT) seguida dedesnaturalización térmica de alta resolución (HRM). Se diseñó una reacción que incluye dos pares deiniciadores (dúplex), uno específico de un fragmento de Amelogenina (AMEL) yotro específico de cromosoma Y. Esta reacción permite cuantificar y detectar lapresencia de ADN masculino simultáneamente. Mediante desnaturalización térmicade alta resolución, en presencia de un agente intercalar (SYTO9), puedendiferenciarse muestras con  ADN femenino,con un sólo pico de desnaturalización de aquellas con ADN masculino que exhibendos picos.  Ambos difieren en 5,3 ? 5,5 °C. El sistemadesarrollado permite la cuantificación y determinación de sexo con altasensibiliadad ya que exhibe linealidad en un rango de concentración de 16 pg/ula 50 ng/ul. Proponemos un sistema alternativo a sistemas de cuantificacióncomerciales ya que ha demostrado ser eficiente, rápido, sensible, específico yde bajo costo.