INVESTIGADORES
ALONSO Daniel Fernando
congresos y reuniones científicas
Título:
Detección molecular por RT-PCR de células tumorales circulantes en pacientes con melanoma cutáneo de alto riesgo
Autor/es:
VAZQUEZ V; CASTRO MA; GABRI MR; CINAT G; GOMEZ DE; ALONSO DF
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2007
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
La detección molecular de material tumoral circulante contribuye a detectar la enfermedad residual en pacientes oncológicos. En este trabajo, desarrollamos un sistema de detección de células melánicas humanas basado en la retrotranscripción del mensajero seguida de PCR anidada (RT-PCR) de una secuencia del gen de tirosinasa. Para ello, se optimizaron las condiciones de amplificación in vitro utilizando células SKmel-28 y cebadores de diseño interexónico. La sensibilidad alcanzada fue de 1,5 pg del molde inicial de ARN, con una alta especificidad hacia melanoma humano. Para la valoración clínica se analizaron 126 muestras de sangre periférica provenientes de 38 pacientes con melanoma estadíos III y IV libres de enfermedad, enrolados en un protocolo clínico con la vacuna GM3/VSSP (ANMAT). Al ingresar, se tomaron 5 ml de sangre como muestra basal y luego en muestras trimestrales consecutivas. El ARNm de la muestra fue preservado en una solución de tiocianato de guanidinio y guardado a  -70°C hasta su procesamiento por RT-PCR. Se realizó un análisis interino de los resultados sobre los primeros 25 pacientes. Considerando la muestra basal, el 87% (14/16) de los casos positivos para tirosinasa mostró progresión de la enfermedad al año, mientras sólo lo hizo el 45% (4/9) de los negativos (p<0,05; chi2). Además, las 3 primeras determinaciones trimestrales mostraron valor pronóstico (p<0,05; Cox-Mantel). El análisis preliminar del total de los pacientes reclutados mostró una mediana de progresión de 8,5 meses (1-58) observándose signos de progresión en un 71% de los pacientes positivos. El análisis multivariado de los datos arrojó una tasa de riesgo de muerte asociada a una determinación positiva del marcador de 1,41 (0,28-7; NS). Los resultados sugieren la utilidad de este sistema de detección de tirosinasa en sangre por RT-PCR, con posibles aplicaciones pronósticas en el seguimiento de la enfermedad residual de pacientes con melanoma.