INVESTIGADORES
PERAL Maria De Los Angeles
congresos y reuniones científicas
Título:
EFECTO DE LA ANGIOTENSINA II SOBRE LA REACTIVIDAD VASCULAR Y EL POTENCIAL DE MEMBRANA EN CONEJOS HIPERCOLESTEROLÉMICOS. PAPEL DE PROSTANOIDES VASOCONSTRICTORES
Autor/es:
JEREZ S.,; SIERRA L.,; GUERRERO R.,; PERAL DE BRUNO M
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; 50 Reunión Anual de Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2005
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
INTRODUCCION: Los factores de riesgo cardiovascular, tales como hipertensión, hipercolesterolemia y diabetes, producen numerosas alteraciones en la pared vascular y conducen al desarrollo de ateroesclerosis. La disfunción endotelial es una consecuencia de los factores de riesgo cardiovasculares y se caracteriza, entre otros cambios funcionales,  por una disminución de las relajaciones y un incremento de las contracciones dependientes de endotelio. Este fenómeno se debería a que los niveles incrementados de colesterol y sobre todo de LDL oxidado producen alteraciones estructurales en las capas intima, media y adventicia. Varios estudios han demostrado que la hipercolesterolemia y la ateroesclerosis están asociadas con un incremento en la producción de angiotensina II, ya sea por aumento en la actividad de la enzima conversora de angiotensina (Gibbons Am.J.Cardiol. 79:3-8, 1997), como por una “up-regulation” de la expresión de genes que codifican para los receptores AT1 (Yang y col. Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol. 18:1433-1439, 1998). En trabajos previos (Jerez  y col. Eur.J.Pharmacol. 520:127-34, 2005) se ha encontrado que en condiciones de disfunción endotelial experimental generada por inhibición de la óxido nítrico sintetasa, hay un incremento en la reactividad vascular a la angiotensina II  en aorta aislada de conejo,  debido en parte a la liberación de prostanoides vasoconstrictores. OBJETIVOS:   Los objetivos del presente trabajo fueron: - Estudiar si la administración de una dieta rica en colesterol produce alteraciones en la reactividad vascular a la angiotensina II. -Investigar el papel de prostanoides vasoconstrictores en el fenómeno.-Analizar si el mecanismo involucra modificaciones en el potencial de membrana en reposo.MATERIALES Y MÉTODOS 16 conejos machos híbridos de Flanders de 2-3 semanas posteriores al destete (850-1000 g de peso) fueron divididos en dos grupos: un grupo fue alimentado durante 5-6 semanas con una dieta rica enriquecida con colesterol al 1% (n=6, DH) y el otro con una dieta control (n=6, DC). Antes de ser sacrificados fueron anestesiados con Ketamina (75 mg/Kg peso), se canuló la arteria carótida con cateter P40 heparinizado y se les midió la presión arterial utilizando un transductor de presión (Gould, USA) conectado a un registrador potenciométrico o a un sistema de adquisición de datos (BIOPAC, USA). Se extrajo sangre arterial y venosa  para dosar colesterol total, HDL, LDL y glucemia mediante kits comerciales (Wiener, Argentina). Se separó la aorta torácica y se cortaron anillos para realizar mediciones de contractilidad isométrica en baño de órgano aislado y de Potenciales de membrana en reposo (Pm). El protocolo para los experimentos de contractilidad consistió en la realización de una curva dosis respuesta acumulativa (CDRA) a Ach luego de alcanzar el máximo de una contracción con NA 5.10-6 M. Se lava el tejido y a continuación se realiza una CDRA a Ang II. Para estudiar el papel de los prostanoides, se emplearon un inhibidor de la ciclooxigenasa (Indometacina 10-5 M), un antagonista de los receptores de TXA2/PGH2 (SQ29548 10-6 M) y unl inhibidor de la omega hidroxilasa (17 ODYA 10-6 M), que fueron agregados al baño 30 min antes del comienzo de la CDRA a Ang II. Las mediciones del Pm en reposo se realizaron empleando micoelectrodos de vidrio conectados a un amplificador con alta impedancia de entrada (WPI, USA) y a un osciloscopio. Las arterias raspadas y sin raspar se colocaron en una cámara para baño de órgano aislado con controlador de temperatura y el Pm se midió antes (B0) y después de una estimulación con Ang II 10-6 M (A0, al minuto, A5 a los 5 minutos y A10 a los 10 minutos del agregado de la dosis). Luego se lavó el tejido con solución de Krebs y se midió el potencial al minuto (W0) y los 10 minutos (W10). Finalmente se agregó una solución despolarizante de KCl. CONCLUSIONES En el presente trabajo se ha observado que una dieta rica en colesterol incrementa los valores plasmáticos de CT, LDL y HDL generando un modelo hipercolesterólemico sin factores de riesgo asociado, ya que no hubo alteración en la PAM, la glucemia ni variaciones en el peso. El hecho de que no se observen incrementos en los valores de TG avala evidencias clínicas que sugieren que valores elevados de CT constituyen un factor de riego independiente en la fisiopatología de las enfermedades cardiovasculares. Asimismo se comprobó que la hipercolesterolemia generó una disfunción endotelial manifestada por la disminución de la relajación a Ach en arterias de conejos alimentados con DH. En estas condiciones, hubo un incremento en la reactividad vascular a la angiotensina II que fue bloqueado por indometacina, por 17-ODYA y por SQ29548.  Estos resultados sugieren que en presencia de una disfunción endotelial habría liberación de prostanoides vasoconstrictores dependientes de ciclooxigenasa y de omega-hidroxilasa, que actuarían sobre receptores de tipo TXA2/PGH2. En este sentido, Schwartzman y col (J.Biol.Chem.264:11658-62, 1989), uno de los productos de la omega hidroxilasa, el 20-HETE puede ser metabolizado por la ciclooxigenasa a 20-hidroxy PGH2  y 20-hidroxy PGG2. La medición del potencial de membrana en reposo (Pm) mostró que la angiotensina II induce una despolarización en conejos con DH pero no en conejos con DC. Asimismo se observó que esta despolarización es mayor en presencia de un endotelio disfuncional que en ausencia del mismo. Estos resultados sugieren que el mecanismo de acción de los prostanoides vasoconstrictores liberados en condiciones de disfunción endotelial generada por una dieta rica en colesterol sería el incremento en los Pm. Esto coincide con datos previos (Jerez  y col. Eur.J.Pharmacol. 520:127-34, 2005) en los que se demostró que en condiciones de bloqueo de la óxido nítrico sintetasa se liberan prostanoides vasoconstrictores que actúan incrementando la actividad de lcanales de Kca, el Pm y la reactividad a angiotensina II.