DISEÑO DE CONTROLADORES PARA ESTANDARIZACION DE MEDICION DE POTENCIALES DE MEBRANA INTRACELULARES

GRIFASI HUGO,; GUERRERO R.,; PERAL DE BRUNO MARIA

San Miguel de Tucuman

Jornada; VII JORNADAS DE INVESTIGACION DE LA FACULTAD DE MEDICINA – UNT; 2005

FACULTAD DE MEDICINA – UNT

DISEÑO DE CONTROLADORES PARA SETUP DE MEDICION DE POTECIALES DE MEMBRANA INTRACELULARES Grifasi Salvador, Guerrero A. Ramiro y Peral de Bruno María Dpto. Biomédico, Or. Fisiología, Fac.  Medicina - Lab. Electrofisiología INSIBIO -CONICET. Introducción: En la actualidad en nuestro laboratorio se realizan estudios de reactividad  vascular y conductividad en nervios y músculo esquelético. Para complementar los hallazgos y comprender los aspectos electrofisiologicos nos propusimos poner a punto la técnica de medición  de los potenciales de membrana (Pm) a través de registros intracelulares.Objetivo: Desarrollar los elementos y condiciones necesarios para lograr registrar el Pm acondicionando un setup adecuado con controles de temperatura, pH y oxigenación. Material y método: Trabajamos con acrílico para la construcción de la cámara de inmersión y montaje del tejido, incorporándose un sistema tubular para la oxigenación. Se diseñó y fabricó un autoregulador de temperatura para dicha cámara. Los microelectrodos se fabricaron con tubos capilares no heparinizados se midió diámetro(d) de punta con microscopio de inversión y se lleno con K+ 3 M. Se montó los componentes en una mesa antibribratoria con micromanipulador micrométrico de alcance celular. Resultados: Las micropipetas  luego de ajuste de medición del d a <5um disminuyeron su potencial de offset (potencial de fuga) de –23,5±4,2 a 6,1±1,0 mV, n=15 X±E.S.M, p<0.02. El regulador de temperatura ajusto la misma a 37±03 oC y se obtuvieron un Pm en reposo sin variación significativa, la cámara de registro permitió trabajar con idoneidad mientras se oxigena y mantiene la temperatura simultáneamente. Conseguimos valores de Pm similares a los referidos en la bibliografía. Conclusión: Habiendo generado los elementos necesarios para el registro intracelular y consiguiendo obtener valores óptimos de Pm, estandarizamos las condiciones  necesarias para realizar estudios intracelulares con diferentes protocolos ajustados a cada preparación biológica.