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ESTUDIOS SOBRE LA PARTICIPACIÓN DE CADHERINA EPITELIAL EN LA FORMACIÓN DEL RESERVORIO ESPERMÁTICO OVIDUCTAL EN BOVINOS Y EN LA FECUNDACIÓN Vazquez-Levin M.H.* Instituto de Biología y Medicina Experimental IBYME CONICET-UBA.* Instituto de Biología y Medicina Experimental IBYME CONICET-UBA * Los estudios presentados fueron realizados en colaboración con los Dres Pablo Cética y Gabriel Dalvit (Cátedra de Química Biológica, Facultad de Ciencias Veterinarias, UBA) y la Dra Silvina Pérez Martínez (Facultad de Medicina, UBA), y forman parte de la tesis doctoral de la Med. Vet. Julieta Caballero desarrollada bajo mi dirección y la co-dirección del Dr. Cética..* Instituto de Biología y Medicina Experimental IBYME CONICET-UBA * Los estudios presentados fueron realizados en colaboración con los Dres Pablo Cética y Gabriel Dalvit (Cátedra de Química Biológica, Facultad de Ciencias Veterinarias, UBA) y la Dra Silvina Pérez Martínez (Facultad de Medicina, UBA), y forman parte de la tesis doctoral de la Med. Vet. Julieta Caballero desarrollada bajo mi dirección y la co-dirección del Dr. Cética. La Cadherina epitelial (cadE) es una glicoproteína de transmembrana que interviene en la adhesión celular de manera dependiente del ión calcio, uniéndose por sus dominios extracelulares a otras moléculas de cadE en células adyacentes. En mamíferos, el transporte espermático en el tracto de la hembra y la interacción de las gametas involucra eventos de adhesión no dilucidados a nivel molecular. Nos propusimos caracterizar la expresión de cadE en tejidos del tracto reproductor y en las gametas y evaluar su participación en la interacción del espermatozoide con las células del oviducto y estructuras del complejo cumulus oophorus-ovocito (CCO). Utilizamos el modelo bovino para llevar a cabo un conjunto de estudios, cuyos resultados se resumen a continuación: CadE fue inmunolocalizada 1) en células epiteliales de secciones de tejido oviductal y en células epiteliales oviductales (CEO) en cultivo, 2) en las células del cumulus y en sus proyecciones en la zona pellucida (ZP), y en el oolema ovocitario, 3) en el capuchón acrosomal y reborde apical de espermatozoides (del eyaculado o previamente congelados) no capacitados con acrosomas intactos, 4) en el reborde apical de espermatozoides con acrosomas intactos y capacitados in vitro en un medio definido, y 5) en estructuras que corresponderían a la membrana acrosomal interna y al segmento ecuatorial de espermatozoides reaccionados con lisofosfatidilcolina. En los estudios de interacción con las CEO se determinó que los espermatozoides unidos a las CEO y los liberados del co-cultivo por agregado de heparina presentaron la misma localización de cadE que la encontrada en espermatozoides no capacitados y capacitados in vitro en medio definido. La preincubación de los espermatozoides con anticuerpos anti cadE condujo a una disminución (p<0,001) del número de espermatozoides unidos a las CEO in vitro. En los ensayos de interacción de gametas se determinó que la preincubación de espermatozoides con anticuerpos anti cadE inhibió (p<0,05) su capacidad de fecundar los ovocitos in vitro, utilizando tanto ovocitos denudados como CCOs; asimismo, el anticuerpo anti cadE produjo una inhibición significativa (p<0,05) de la interacción espermática con la ZP y con el oolema en ensayos específicos. Los estudios presentados describen, por primera vez en el modelo bovino, la presencia de cadE en espermatozoides, estructuras del CCO y en células oviductales, y sugieren la participación de esta proteína en la adhesión celular durante la formación/disociación del reservorio oviductal y la fecundación.Cadherina epitelial (cadE) es una glicoproteína de transmembrana que interviene en la adhesión celular de manera dependiente del ión calcio, uniéndose por sus dominios extracelulares a otras moléculas de cadE en células adyacentes. En mamíferos, el transporte espermático en el tracto de la hembra y la interacción de las gametas involucra eventos de adhesión no dilucidados a nivel molecular. Nos propusimos caracterizar la expresión de cadE en tejidos del tracto reproductor y en las gametas y evaluar su participación en la interacción del espermatozoide con las células del oviducto y estructuras del complejo cumulus oophorus-ovocito (CCO). Utilizamos el modelo bovino para llevar a cabo un conjunto de estudios, cuyos resultados se resumen a continuación: CadE fue inmunolocalizada 1) en células epiteliales de secciones de tejido oviductal y en células epiteliales oviductales (CEO) en cultivo, 2) en las células del cumulus y en sus proyecciones en la zona pellucida (ZP), y en el oolema ovocitario, 3) en el capuchón acrosomal y reborde apical de espermatozoides (del eyaculado o previamente congelados) no capacitados con acrosomas intactos, 4) en el reborde apical de espermatozoides con acrosomas intactos y capacitados in vitro en un medio definido, y 5) en estructuras que corresponderían a la membrana acrosomal interna y al segmento ecuatorial de espermatozoides reaccionados con lisofosfatidilcolina. En los estudios de interacción con las CEO se determinó que los espermatozoides unidos a las CEO y los liberados del co-cultivo por agregado de heparina presentaron la misma localización de cadE que la encontrada en espermatozoides no capacitados y capacitados in vitro en medio definido. La preincubación de los espermatozoides con anticuerpos anti cadE condujo a una disminución (p<0,001) del número de espermatozoides unidos a las CEO in vitro. En los ensayos de interacción de gametas se determinó que la preincubación de espermatozoides con anticuerpos anti cadE inhibió (p<0,05) su capacidad de fecundar los ovocitos in vitro, utilizando tanto ovocitos denudados como CCOs; asimismo, el anticuerpo anti cadE produjo una inhibición significativa (p<0,05) de la interacción espermática con la ZP y con el oolema en ensayos específicos. Los estudios presentados describen, por primera vez en el modelo bovino, la presencia de cadE en espermatozoides, estructuras del CCO y en células oviductales, y sugieren la participación de esta proteína en la adhesión celular durante la formación/disociación del reservorio oviductal y la fecundación.cumulus oophorus-ovocito (CCO). Utilizamos el modelo bovino para llevar a cabo un conjunto de estudios, cuyos resultados se resumen a continuación: CadE fue inmunolocalizada 1) en células epiteliales de secciones de tejido oviductal y en células epiteliales oviductales (CEO) en cultivo, 2) en las células del cumulus y en sus proyecciones en la zona pellucida (ZP), y en el oolema ovocitario, 3) en el capuchón acrosomal y reborde apical de espermatozoides (del eyaculado o previamente congelados) no capacitados con acrosomas intactos, 4) en el reborde apical de espermatozoides con acrosomas intactos y capacitados in vitro en un medio definido, y 5) en estructuras que corresponderían a la membrana acrosomal interna y al segmento ecuatorial de espermatozoides reaccionados con lisofosfatidilcolina. En los estudios de interacción con las CEO se determinó que los espermatozoides unidos a las CEO y los liberados del co-cultivo por agregado de heparina presentaron la misma localización de cadE que la encontrada en espermatozoides no capacitados y capacitados in vitro en medio definido. La preincubación de los espermatozoides con anticuerpos anti cadE condujo a una disminución (p<0,001) del número de espermatozoides unidos a las CEO in vitro. En los ensayos de interacción de gametas se determinó que la preincubación de espermatozoides con anticuerpos anti cadE inhibió (p<0,05) su capacidad de fecundar los ovocitos in vitro, utilizando tanto ovocitos denudados como CCOs; asimismo, el anticuerpo anti cadE produjo una inhibición significativa (p<0,05) de la interacción espermática con la ZP y con el oolema en ensayos específicos. Los estudios presentados describen, por primera vez en el modelo bovino, la presencia de cadE en espermatozoides, estructuras del CCO y en células oviductales, y sugieren la participación de esta proteína en la adhesión celular durante la formación/disociación del reservorio oviductal y la fecundación.cumulus y en sus proyecciones en la zona pellucida (ZP), y en el oolema ovocitario, 3) en el capuchón acrosomal y reborde apical de espermatozoides (del eyaculado o previamente congelados) no capacitados con acrosomas intactos, 4) en el reborde apical de espermatozoides con acrosomas intactos y capacitados in vitro en un medio definido, y 5) en estructuras que corresponderían a la membrana acrosomal interna y al segmento ecuatorial de espermatozoides reaccionados con lisofosfatidilcolina. En los estudios de interacción con las CEO se determinó que los espermatozoides unidos a las CEO y los liberados del co-cultivo por agregado de heparina presentaron la misma localización de cadE que la encontrada en espermatozoides no capacitados y capacitados in vitro en medio definido. La preincubación de los espermatozoides con anticuerpos anti cadE condujo a una disminución (p<0,001) del número de espermatozoides unidos a las CEO in vitro. En los ensayos de interacción de gametas se determinó que la preincubación de espermatozoides con anticuerpos anti cadE inhibió (p<0,05) su capacidad de fecundar los ovocitos in vitro, utilizando tanto ovocitos denudados como CCOs; asimismo, el anticuerpo anti cadE produjo una inhibición significativa (p<0,05) de la interacción espermática con la ZP y con el oolema en ensayos específicos. Los estudios presentados describen, por primera vez en el modelo bovino, la presencia de cadE en espermatozoides, estructuras del CCO y en células oviductales, y sugieren la participación de esta proteína en la adhesión celular durante la formación/disociación del reservorio oviductal y la fecundación.zona pellucida (ZP), y en el oolema ovocitario, 3) en el capuchón acrosomal y reborde apical de espermatozoides (del eyaculado o previamente congelados) no capacitados con acrosomas intactos, 4) en el reborde apical de espermatozoides con acrosomas intactos y capacitados in vitro en un medio definido, y 5) en estructuras que corresponderían a la membrana acrosomal interna y al segmento ecuatorial de espermatozoides reaccionados con lisofosfatidilcolina. En los estudios de interacción con las CEO se determinó que los espermatozoides unidos a las CEO y los liberados del co-cultivo por agregado de heparina presentaron la misma localización de cadE que la encontrada en espermatozoides no capacitados y capacitados in vitro en medio definido. La preincubación de los espermatozoides con anticuerpos anti cadE condujo a una disminución (p<0,001) del número de espermatozoides unidos a las CEO in vitro. En los ensayos de interacción de gametas se determinó que la preincubación de espermatozoides con anticuerpos anti cadE inhibió (p<0,05) su capacidad de fecundar los ovocitos in vitro, utilizando tanto ovocitos denudados como CCOs; asimismo, el anticuerpo anti cadE produjo una inhibición significativa (p<0,05) de la interacción espermática con la ZP y con el oolema en ensayos específicos. Los estudios presentados describen, por primera vez en el modelo bovino, la presencia de cadE en espermatozoides, estructuras del CCO y en células oviductales, y sugieren la participación de esta proteína en la adhesión celular durante la formación/disociación del reservorio oviductal y la fecundación.in vitro en un medio definido, y 5) en estructuras que corresponderían a la membrana acrosomal interna y al segmento ecuatorial de espermatozoides reaccionados con lisofosfatidilcolina. En los estudios de interacción con las CEO se determinó que los espermatozoides unidos a las CEO y los liberados del co-cultivo por agregado de heparina presentaron la misma localización de cadE que la encontrada en espermatozoides no capacitados y capacitados in vitro en medio definido. La preincubación de los espermatozoides con anticuerpos anti cadE condujo a una disminución (p<0,001) del número de espermatozoides unidos a las CEO in vitro. En los ensayos de interacción de gametas se determinó que la preincubación de espermatozoides con anticuerpos anti cadE inhibió (p<0,05) su capacidad de fecundar los ovocitos in vitro, utilizando tanto ovocitos denudados como CCOs; asimismo, el anticuerpo anti cadE produjo una inhibición significativa (p<0,05) de la interacción espermática con la ZP y con el oolema en ensayos específicos. Los estudios presentados describen, por primera vez en el modelo bovino, la presencia de cadE en espermatozoides, estructuras del CCO y en células oviductales, y sugieren la participación de esta proteína en la adhesión celular durante la formación/disociación del reservorio oviductal y la fecundación.in vitro en medio definido. La preincubación de los espermatozoides con anticuerpos anti cadE condujo a una disminución (p<0,001) del número de espermatozoides unidos a las CEO in vitro. En los ensayos de interacción de gametas se determinó que la preincubación de espermatozoides con anticuerpos anti cadE inhibió (p<0,05) su capacidad de fecundar los ovocitos in vitro, utilizando tanto ovocitos denudados como CCOs; asimismo, el anticuerpo anti cadE produjo una inhibición significativa (p<0,05) de la interacción espermática con la ZP y con el oolema en ensayos específicos. Los estudios presentados describen, por primera vez en el modelo bovino, la presencia de cadE en espermatozoides, estructuras del CCO y en células oviductales, y sugieren la participación de esta proteína en la adhesión celular durante la formación/disociación del reservorio oviductal y la fecundación.p<0,001) del número de espermatozoides unidos a las CEO in vitro. En los ensayos de interacción de gametas se determinó que la preincubación de espermatozoides con anticuerpos anti cadE inhibió (p<0,05) su capacidad de fecundar los ovocitos in vitro, utilizando tanto ovocitos denudados como CCOs; asimismo, el anticuerpo anti cadE produjo una inhibición significativa (p<0,05) de la interacción espermática con la ZP y con el oolema en ensayos específicos. Los estudios presentados describen, por primera vez en el modelo bovino, la presencia de cadE en espermatozoides, estructuras del CCO y en células oviductales, y sugieren la participación de esta proteína en la adhesión celular durante la formación/disociación del reservorio oviductal y la fecundación.in vitro. En los ensayos de interacción de gametas se determinó que la preincubación de espermatozoides con anticuerpos anti cadE inhibió (p<0,05) su capacidad de fecundar los ovocitos in vitro, utilizando tanto ovocitos denudados como CCOs; asimismo, el anticuerpo anti cadE produjo una inhibición significativa (p<0,05) de la interacción espermática con la ZP y con el oolema en ensayos específicos. Los estudios presentados describen, por primera vez en el modelo bovino, la presencia de cadE en espermatozoides, estructuras del CCO y en células oviductales, y sugieren la participación de esta proteína en la adhesión celular durante la formación/disociación del reservorio oviductal y la fecundación.p<0,05) su capacidad de fecundar los ovocitos in vitro, utilizando tanto ovocitos denudados como CCOs; asimismo, el anticuerpo anti cadE produjo una inhibición significativa (p<0,05) de la interacción espermática con la ZP y con el oolema en ensayos específicos. Los estudios presentados describen, por primera vez en el modelo bovino, la presencia de cadE en espermatozoides, estructuras del CCO y en células oviductales, y sugieren la participación de esta proteína en la adhesión celular durante la formación/disociación del reservorio oviductal y la fecundación.in vitro, utilizando tanto ovocitos denudados como CCOs; asimismo, el anticuerpo anti cadE produjo una inhibición significativa (p<0,05) de la interacción espermática con la ZP y con el oolema en ensayos específicos. Los estudios presentados describen, por primera vez en el modelo bovino, la presencia de cadE en espermatozoides, estructuras del CCO y en células oviductales, y sugieren la participación de esta proteína en la adhesión celular durante la formación/disociación del reservorio oviductal y la fecundación.p<0,05) de la interacción espermática con la ZP y con el oolema en ensayos específicos. Los estudios presentados describen, por primera vez en el modelo bovino, la presencia de cadE en espermatozoides, estructuras del CCO y en células oviductales, y sugieren la participación de esta proteína en la adhesión celular durante la formación/disociación del reservorio oviductal y la fecundación.

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