Inmunodetección de cadherina neural en espermatozoides de toro.

ARZONDO, MM; MARÍN-BRIGGILER, CI; CETICA, P; SALAMA, F; VAZQUEZ-LEVIN, MH

Buenos Aires, Argentina

Congreso; XI Jornadas Anuales Sociedad Argentina de Biología; 2009

Sociedad Argentina de Biología

INMUNODETECCION DE CADHERINA NEURAL EN ESPERMATOZOIDES DE TORO 1Arzondo MM, 1Marín-Briggiler CI, 2Cética P, 1Salama F, 1Vazquez-Levin MH. 1IBYME, CONICET-UBA; 2INITRA, Facultad de Ciencias Veterinarias-UBA. Buenos Aires, Argentina. Introducción: Las proteínas cadherina epitelial (cad-E) y neural (cad-N) participan en la adhesión celular. Nuestro grupo caracterizó la expresión de cad-E en espermatozoides (esperm.) bovinos y su rol en la fecundación. Hasta el presente no hay evidencias de la expresión de cad-N en esta especie. Objetivos: Inmunodetectar cad-N en esperm. bovinos descongelados. Métodos: 1) Se identificaron las formas proteicas espermáticas de cad-N; 2) Se evaluó la localización de cad-N en esperm. no capacitados (NC), capacitados con heparina (C-HEP) y su control (heparina+glucosa: C-HGLU) y en reaccionados con ionóforo de calcio A23187 (R). Para detectar cad-N se usó el anticuerpo H-63 (Sta Cruz Biotech). Resultados & Discusión: En extractos espermáticos se identificó la forma completa de cad-N (135 kDa). En esperm. NC, el patrón predominante (P1) presentó señal en la región acrosomal y postacrosomal (84±6; media±DEM;n=36). Resultados similares se obtuvieron con esperm. incubados con el anticuerpo antes de ser fijados. En esperm. C-HEP, P1 fue mayoritario (63±9; n=21) pero menor, observándose más células con señal solo acrosomal (P2) o postacrosomal (P3). Este cambio no se observó en esperm. C-HGLU (P1: 82±18). En suspensiones de esperm. R, se identificó un patrón de tinción en el segmento ecuatorial (P4) (R: 22±6; control: 1±1; n=21). Más del 90% de células P4 fueron clasificadas como reaccionadas por co-localización con la lectina de Pisum sativum. Por primera vez se describe la expresión de cad-N en esperm. bovinos y su localización en regiones celulares de interacción con el ovocito. Version publicada en Biocell IMMUNODETECTION OF NEURAL CADHERIN IN BULL SPERMATOZOA 1Arzondo MM1, Marín-Briggiler CI, 2Cética P, 1Salama F, 1Vazquez-Levin MH. 1IBYME, CONICET-UBA; 2INITRA, School of Veterinary Sciences-UBA. Buenos Aires, Argentina. Introduction: Epithelial (E-cad) and neural (N-cad) cadherin  proteins participate in cell-cell adhesion. Our group has characterized the expression of E-cad in bull sperm and its involvement in fertilization. However, no studies have been reported on the presence of N-cad in bull sperm. Aims: to immunodetect N-cad in frozen-thawed bull sperm. Methods: 1) N-cad protein sperm forms were identified; 2) N-cad localization patterns were characterized in non-capacitated (NC), heparin-capacitated (C-HEP) and its control (heparin + glucose: C HGLU), and in A23187 Ca2+ ionophore-acrosome reacted sperm (R). To detect N-cad, the H-63 antibody (Sta Cruz Biotech) was used. Results & Discussion: In protein sperm extracts, the 135 kDa N-cad form was identified. In NC sperm, the main pattern (P1) (84±6; mean±SDM; n=36) showed a signal in the acrosomal and postacrosomal regions. Similar results were obtained with sperm incubated with H-63 prior to fixation. In C-HEP sperm, P1 was preponderant (63±9; n=21) but lower, with more cells with staining only in the acrosomal (P2) or postacrosomal (P3) regions. This shift was not found in C-HGLU sperm (P1: 82±18). In R-sperm suspensions, a staining pattern in the equatorial segment (P4) was observed (R: 22±6; control: 1±1; n=21). Over 90% of P4 cells were classified as R after co-localization with Pisum sativum agglutinin. This is the first report on bull sperm N-cad expression and its localization in cell regions involved in gamete interaction.