Isoformas de caderina-E y su inmunolocalización en el espermatozoide humano

LENTZ, VAZQUEZ-LEVIN Y COL (VER DETALLE EN RESUMEN)

Mar del Plata, Argentina

Congreso; I Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas.; 2004

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

Isoformas de cadherina-E  y su inmunolocalización en el espermatozoide humano Ezequiel Lentz; Clara Marín-Briggiler; Florencia Veiga; Mónica Vazquez-Levin. IBYME CONICET UBA. Bs As Argentina   La caderina E (cadE) es una molécula de adhesión célula-célula de 120 KDa que presenta cinco dominios caderina extracelulares, uno transmembrana y uno citoplasmático.  Estudios de nuestro grupo describieron su presencia en el espermatozoide y sugieren su participación en la interacción de gametas. Ensayos con un anticuerpo dirigido contra el dominio caderina 5 revelaron la presencia de 4 isoformas espermáticas de cadE de 122, 105, 97 y 86 KDa (Lentz et al, 2004). El objetivo del estudio fue iniciar la caracterización bioquímica de las isoformas de cadE y determinar su distribución en el espermatozoide. Se realizaron ensayos de extracción, tratamientos enzimáticos, “Western immunoblotting” e inmunocitoquímica con tres anticuerpos anti cadE. Utilizando un anticuerpo dirigido contra el dominio extracelular caderina 2 de cadE se detectaron las formas espermáticas de 122, 97 y 86 KDa, mientras que un anticuerpo contra un epítope del dominio intracelular detectó las de 122 y 105 KDa. Estos resultados sugieren que cadE105 está truncada en el extremo N-terminal y cadE97 y 86 lo están en el C-terminal. CadE86 fue extraída del espermatozoide en un buffer con NaCl 1 M y fue inmunodetectada en fluído de cauda epididimario y plasma seminal; su señal se encontró disminuída en espermatozoides capacitados. El tratamiento de espermatozoides con la enzima PLC-PI resultó en la remoción de cadE86 y cadE97, sugiriendo que cadE97 está anclada a membrana vía Glicosil Fosfatidil Inositol (GPI).  Ensayos de inmunocitoquímica con los anticuerpos dirigidos contra la región extracelular de cadE mostraron su presencia en la cabeza y flagelo espermáticos. Los estudios con el anticuerpo contra el epítope intracelular revelaron una señal solo en la cola del espermatozoide, indicando cadE122 y 105 estarían localizadas en el flagelo mientras que cadE97 y 86 en cabeza y flagelo. En conclusión, se identificaron cuatro isoformas de cadE en el espermatozoide humano que tendrían una localización celular diferencial.