Estudio bioquímico y molecular del sistema proacrosina/acrosina humano.

FALCINELLI , VAZQUEZ-LEVIN Y COL (VER DETALLE RESUMEN)

Mar del Plata, Argentina

Congreso; I Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

Estudio bioquímico y molecular del sistema proacrosina/acrosina humano Andrea Falcinelli, Juan Carlos Biancotti, Liliana Dain, Mónica Vazquez Levin. IBYME CONICET-UBA CEGYR Bs As Argentina   Acrosina (EC 3.421.10) es una proteasa acrosomal espermática tipo tripsina que participa en la penetración de la zona pellucida (ZP) durante la fecundación. Estudios de nuestro grupo mostraron que una disminución en la actividad enzimática de acrosina se asocia a infertilidad en pacientes con infertilidad sin causa aparente. Se realizaron estudios para determinar las bases moleculares de las alteraciones en la actividad enzimática de acrosina. Se evaluó: el patrón de activación de proacrosina en extractos proteicos espermáticos por Western immunoblotting y la secuencia nucleotídica codificante de sitios funcionales de proacrosina por secuenciación directa de productos de PCR. Los estudios bioquímicos revelaron alteraciones en el patrón de activación en todos los casos de actividad anormal (n=4), contrastando con perfiles normales en pacientes con actividad normal (n=8). No se encontraron cambios en la secuencia codificante de los aminoácidos del sitio activo, del sitio de unión al sustrato, de residuos cisteína (puentes S-S de relevancia estructural), y de algunos puntos de clivaje para la activación de proacrosina, entre otros. El análisis de secuenciación permitió identificar un punto de cambio en el triplete codificante de Tyr235, blanco de fosforilación de TK, y potencial regulador de la activación del zimógeno (A704-G; Tyr a Cys). Se identificaron otros tres puntos de cambio en los nucleótidos 528 (A528-G; Ile a Met), 593 (G593-A;Gly a Glu), y 829 (A829-G; Met a Val) del gen. Ambos alelos se encontraron en pacientes y controles. La existencia de una segunda copia truncada del gen en el genoma explicaría la presencia de estos alelos alternativos en tres casos, no así para el nucleótido 829. En conclusión, se encontraron alteraciones en la activación de proacrosina en individuos con actividad enzimática anormal, pero no se identificaron cambios en la secuencia aminoacídica de la proteína. Se hallaron puntos polimórficos potenciales en los exones 4 y 5 del gen.