Anticuerpos contra la proteasa espermática acrosina. II. Modelo de inmunidad adquirida para el estudio de su rol en la fecundación.

VAZQUEZ-LEVIN MH Y COL

Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA

Jornada; II Jornadas Inmunología de la reproducción; 2004

Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA

1Veaute C, 1Furlong LI, 2Cameo M, 1Vazquez-Levin MH. 1IBYME CONICET-UBA, 2BR, Bs As Argentina.  La inmunización con proteínas espermáticas es utilizada en el desarrollo de modelos experimentales para el estudio de su rol en la fecundación. Acrosina es una proteasa de tipo tripsina almacenada como zimógeno (proacrosina) en el acrosoma de espermatozoide cuyo rol en la interacción de gametas se encuentra en revisión. Se desarrolló un modelo experimental de inmunización genética contra proacrosina humana para obtener anticuerpos específicos y estudiar su efecto sobre las funciones de proacrosina/acrosina y sobre la fecundación. Para ello, se construyó un vector de expresión eucariota con el plásmido pCMV-SF2 conteniendo el ADNc de proacrosina humana (pSF2-Acro) y se inyectó en ratones hembra y macho. Se comprobó la producción de anticuerpos antiacrosina en los animales inmunizados, presentando títulos de hasta 1:51200 (hembras) y 1:102400 (machos) según ensayo de ELISA. Los anticuerpos obtenidos reconocieron la proteína nativa de espermatozoides humanos y de ratón, y presentaron una mayor reactividad sobre la región C-terminal de proacrosina recombinante. Los anticuerpos produjeron una inhibición de la unión a ZPA y, en algunos casos, afectaron la activación de proacrosina y la actividad de proteasa de acrosina. En ensayos de fecundación in vitro con gametas de ratón, se observó una inhibición del porcentaje de ovocitos fecundados en presencia de inmunoglobulinas (0,08 mg/ml) de sueros de animales inmunizados con pSF2-Acro (pSF2-Acro: 10-37 vs pSF2: 81% ovocitos fecundados; P<0,05). La fertilidad de los ratones inmunizados también se encontró afectada, observándose una tendencia a un menor número de crías en las hembras inmunizadas (pSF2-Acro:5±3 vs pSF2:8±2 crías/hembra), y a un menor tamaño de estas crías. Los machos inmunizados fueron completamente infértiles. Los resultados presentados muestran que acrosina puede desencadenar una respuesta inmune en el ratón. La presencia de anticuerpos antiacrosina alteró las funciones del sistema proacrosina/acrosina y condujo a una inhibición de la tasa de fecundación in vitro.      La inmunización con proteínas espermáticas es utilizada en el desarrollo de modelos experimentales para el estudio de su rol en la fecundación. Acrosina es una proteasa de tipo tripsina almacenada como zimógeno (proacrosina) en el acrosoma de espermatozoide cuyo rol en la interacción de gametas se encuentra en revisión. Se desarrolló un modelo experimental de inmunización genética contra proacrosina humana para obtener anticuerpos específicos y estudiar su efecto sobre las funciones de proacrosina/acrosina y sobre la fecundación. Para ello, se construyó un vector de expresión eucariota con el plásmido pCMV-SF2 conteniendo el ADNc de proacrosina humana (pSF2-Acro) y se inyectó en ratones hembra y macho. Se comprobó la producción de anticuerpos antiacrosina en los animales inmunizados, presentando títulos de hasta 1:51200 (hembras) y 1:102400 (machos) según ensayo de ELISA. Los anticuerpos obtenidos reconocieron la proteína nativa de espermatozoides humanos y de ratón, y presentaron una mayor reactividad sobre la región C-terminal de proacrosina recombinante. Los anticuerpos produjeron una inhibición de la unión a ZPA y, en algunos casos, afectaron la activación de proacrosina y la actividad de proteasa de acrosina. En ensayos de fecundación in vitro con gametas de ratón, se observó una inhibición del porcentaje de ovocitos fecundados en presencia de inmunoglobulinas (0,08 mg/ml) de sueros de animales inmunizados con pSF2-Acro (pSF2-Acro: 10-37 vs pSF2: 81% ovocitos fecundados; P<0,05). La fertilidad de los ratones inmunizados también se encontró afectada, observándose una tendencia a un menor número de crías en las hembras inmunizadas (pSF2-Acro:5±3 vs pSF2:8±2 crías/hembra), y a un menor tamaño de estas crías. Los machos inmunizados fueron completamente infértiles. Los resultados presentados muestran que acrosina puede desencadenar una respuesta inmune en el ratón. La presencia de anticuerpos antiacrosina alteró las funciones del sistema proacrosina/acrosina y condujo a una inhibición de la tasa de fecundación in vitro.