Epigenética en el espermatozoide: protaminas y descondensación cromatínica

CAMBIASSO MY; JUAREZ YR; JULIANELLI VL; ROMANATO M; PIÑEIRO DE CALVO L; CALVO JC

Congreso; LX Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2015

La epigenética puede modificar la expresión génica del espermatozoide ycondicionar la fecundación y el desarrollo del embrión. Entre los factoresepigenéticos, se encuentran la posible metilación de protaminas (Pr), elcontenido de las mismas y la relación Pr1/Pr2, que podrían afectar la descondensación cromatínica del espermatozoide. (1) Presentamos el aislamiento, electroforesis, cuantificación y caracterización por Western blot (WB) de Pr. El semen de donantes normozoospérmicos (OMS) selavó en buffer Tris/NaCl y resuspendió en buffer con SDS. Luegode sonicar se separaron los núcleos en colchón de sacarosa. Elprecipitado nuclear se lavó con PMSF y las proteínas se aislaroncon urea y DTT y tratamiento posterior con etanol frío, HCl y TCA.Luego de electroforesis ácida se analizó por WB la presencia dePr1 y Pr2; otro gel se analizó digitalmente para obtener la relacióncuantitativa entre Pr. Demostramos la presencia de Pr1 y Pr2, delos posibles productos de procesamiento y/o modificación postraduccionalde esta última y generamos una curva de calibración para cuantificar larelación Pr1/Pr2 en muestras de pacientes. 2)Evaluamos la descondensación cromatínica in vitro de espermatozoides de donantes normozoospérmicos, previamente incubados en condiciones capacitantes, con heparina (H) y/o dermatán sulfato (DS) y GSH. Ambos glicosaminoglicanos (GAGs) descondensaron la cromatina espermática, aunque con diferente potencia (DS vs H p