El endosulfan afecta la descondensación de la cromatina del núcleo espermático de ratón

SANCHEZ MELISA; LO NOSTRO F; ROMANATO M; JULIANELLI VL; CALVO L; CALVO JC

Cancún

Congreso; Magno Congreso Internacional de Endocrinología, Diabetes y Reproducción. XXIII Reunión Bienal de la Asociación Latinoamericana de Investigaciones en Reproducción Humana (ALIRH).; 2013

ALIRH

Justificación La descondensación de la cromatina espermática requiere la tiorreducción de disulfuros de protaminas por GSH y una molécula con carga negativa para intercambio con histonas ovocitarias. Los pesticidas en el tratamiento de cultivos, implica un  peligro potencial para las personas que trabajan con los mismos o viven cerca de los lugares tratados con estos compuestos. Evaluamos el efecto de  endosulfán sobre la descondensación espermática  encontrando  un aumento significativo  en la misma cuando se utiliza  endosulfán.   Objetivos Evaluar en el sistema murino el efecto del endosulfán sobre la descondensación de la cromatina espermática.   Metodología Los animales se sacrificaron según las normas establecidas para el tratamiento ético de animales. En forma aséptica se obtuvieron espermatozoides epididimarios de ratones CF-1 de 10-14 semanas de edad, incubándolos con concentraciones crecientes de endosulfán puro o formulado (100 pM a 100 µM) en el caso de los grupos tratados, o en presencia de medio o DMSO para los grupos control. Seguidamente se  incubaron  1-2 x106 espermatozoides en medio con Heparina y GSH en un volumen final de 0.3 ml durante distintos tiempos a 37 °C en 5% de CO2. Se fijaron con glutaraldehído al 2% en PBS y se determinó en microscopio con contraste de fase el porcentaje de espermatozoides descondensados. Por otro lado, se analizó el estado redox de las protaminas asociadas al DNA espermático incubados con endosulfán (100 µM) y controles (Medio y DMSO) aplicando la técnica de tinción con el reactivo monobromobimane (mBBr) y la observación utilizando microscopia de fluorescencia con el posterior análisis de la intensidad de fluorescencia media el programa Image J. Los experimentos se realizaron  por duplicado evaluando 200 células en cada muestra.     Resultados y conclusiones El endosulfán puro produce un aumento significativo de la descondensación cuando los espermatozoides se incuban con una concentración de 1 µM y 100 µM (p<0.05 y p<0.001 respectivamente versus GSH + Heparina). Sin embargo, cuando los espermatozoides son incubados con dos marcas distintas de endosulfán comercial solo se ve diferencia cuando se utiliza la concentración más alta (100 µM) (p<0.001). Cuando se evaluó el efecto de este pesticida sobre el estado redox de las protaminas mediante monoBromoBimane no se obtuvieron diferencias significativas entre los controles y los tratamientos. Los primeros resultados obtenidos descondensando in vitro en presencia de heparina y GSH espermatozoides previamente incubados con endosulfán, pusieron de manifiesto que este modelo podría utilizarse como centinela para evaluar  posibles efectos de tóxicos ambientales.