Identificación de heparán sulfato en el ovocito humano y caracterización parcial de los glicosaminoglicanos sintetizados por el complejo cúmulus ovocito

ROMANATO M; FARRANDO B; JULIANELLI VL; CALVO L; CALVO JC

Cancún

Congreso; Magno Congreso Internacional de Endocrinología, Diabetes y Reproducción. XXIII Reunión Bienal de la Asociación Latinoamericana de Investigaciones en Reproducción Humana (ALIRH).; 2013

ALIRH

La capacidad descondensante del ovocito varía con su maduración, presentando el máximo en metafase II (MII). El Complejo Cúmulus Ovocito contiene glicosaminoglicanos (GAGs), como el Heparán Sulfato y hemos propuesto que HS presente en ooplasma actuaría como agente descondensante del espermatozoide humano in vivo. Objetivos: 1) Identificar presencia de HS en ovocitos humanos en diferentes estadios de maduración. 2) Caracterizar GAGs sintetizados por ovocito, Células del Cúmulus o CCO intacto. MyM: 1) Vesículas Germinales, MII y CC (Fertilab/CEGyR) se fijaron, permeabilizaron y bloquearon. Se utilizó anticuerpo primario monoclonal (IgM) y segundo anticuerpo policlonal anti IgM-FITC murino. Se observó al microscopio confocal y se cuantificó intensidad de fluorescencia (Unidades Arbitrarias, Image J). 2) Ovocitos, CCOs o CC se cultivaron 24hs en presencia de [35S]-sulfato y [3H]-glucosamina. Se hicieron extractos con clorhidrato de guanidina, se cromatografiaron en columnas de tamiz molecular y se determinó radiactividad. Resultados: 1) HS está presente en MII (65.510 ± 1.582 UA vs. 8.579 ± 742 UA control, t-test, p<0.05, n=11), en VG (186.000 ± 8.065 UA vs. 1.996 ± 4 UA, t-test, p<0.05, n=26) y CC (31.010 ± 3.971 UA vs 10.900 ± 5.985 UA, t-test, p<0.05). 2) Resultados preliminares mostrarían síntesis de GAGs/proteoglicanos sulfatados en ovocitos, CC y CCOs intactos pero en diferente magnitud. Conclusiones: 1) La localización ubicua del HS ya desde VG estaría reasegurando la descondensación espermática, aunque no pueden descartarse otras funciones y 2) los resultados metabólicos preliminares indicarían que la síntesis del HS requeriría de la integridad del CCO.