INVESTIGADORES
CALVO Juan Carlos
congresos y reuniones científicas
Título:
Efecto de la enzima galactosa-3-O-sulfotransferasa 2 recombinante sobre la acumulación de lípidos en un modelo de adipocitos in vitro
Autor/es:
COSENTINO S; CALZADILLA P; CALVO JC; GUERRA LN
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
En nuestro laboratorio estamos interesados en estudiar proteínas
que
medien
la
interacción
entre
epitelio
y
tejido
adiposo
en
la glándula mamaria. Estudiamos la diferenciación de los preadipocitos
a adipocitos, evaluando acumulación de triglicéridos
(Tg)
y
expresión
del
factor
de
transcripción
adipogénico
C/EBPß.
Previamente
mostramos que una proteína purificada TgIF (Tg inhibit factor), secretada por células mamarias murinas (NMMG), inhibe un 70% tanto la acumulación de lípidos como la expresión de C/EBPß en adipocitos de ratón (cultivos primarios y línea 3T3L1).
Con
MALDI demostramos
que
TgIF
sería
la
enzima galactosa
3-O-sulfotransferasa
2 (GST). Ahora, nuestro objetivo es evaluar
el
efecto de GST recombinante sobre los parámetros descriptos.
cDNA
de GST clonado en pSVK 3 se amplificó utilizando como marcador de selección ampicilina, y se confirmó su presencia con enzimas de restricción. Se obtuvo GST por transfección de células BHK21 (que no producen esta proteína). Los preadipocitos 3T3-L1 se diferenciaron a adipocitos con agentes inductores, en presencia o ausencia de GST recombinante. Realizamos un estudio
temporal
(1,
2
y
4
días)
de
la
expresión
de
C/EBPßß.
Previamente
mostramos que una proteína purificada TgIF (Tg inhibit factor), secretada por células mamarias murinas (NMMG), inhibe un 70% tanto la acumulación de lípidos como la expresión de C/EBPß en adipocitos de ratón (cultivos primarios y línea 3T3L1).
Con
MALDI demostramos
que
TgIF
sería
la
enzima galactosa
3-O-sulfotransferasa
2 (GST). Ahora, nuestro objetivo es evaluar
el
efecto de GST recombinante sobre los parámetros descriptos.
cDNA
de GST clonado en pSVK 3 se amplificó utilizando como marcador de selección ampicilina, y se confirmó su presencia con enzimas de restricción. Se obtuvo GST por transfección de células BHK21 (que no producen esta proteína). Los preadipocitos 3T3-L1 se diferenciaron a adipocitos con agentes inductores, en presencia o ausencia de GST recombinante. Realizamos un estudio
temporal
(1,
2
y
4
días)
de
la
expresión
de
C/EBPßß en adipocitos de ratón (cultivos primarios y línea 3T3L1).
Con
MALDI demostramos
que
TgIF
sería
la
enzima galactosa
3-O-sulfotransferasa
2 (GST). Ahora, nuestro objetivo es evaluar
el
efecto de GST recombinante sobre los parámetros descriptos.
cDNA
de GST clonado en pSVK 3 se amplificó utilizando como marcador de selección ampicilina, y se confirmó su presencia con enzimas de restricción. Se obtuvo GST por transfección de células BHK21 (que no producen esta proteína). Los preadipocitos 3T3-L1 se diferenciaron a adipocitos con agentes inductores, en presencia o ausencia de GST recombinante. Realizamos un estudio
temporal
(1,
2
y
4
días)
de
la
expresión
de
C/EBPßß
durante
la
diferenciación
en:
células
control
no
diferenciada
(CC),
células
diferenciadas
(CD) y células diferenciadas tratadas con GST (DC
+
GST). La expresión de C/EBPß se relativizó por actina y por CC. Su expresión mostró un máximo al día 4, observando en CD una expresión 3 veces mayor que en CC, mientras que GST provocaría una inhibición, al día 4, mayor al 50% (CD: 2.73 UA; CD + GST: 1.32 UA). GST también inhibió la acumulación de Tg en CD, diminuyendo un 31% la media obtenida (CD: 420 + 36 ug Tg/ ug ADN; CD + GST: 288 + 101 ug Tg/ ug ADN). Estos primeros resultados muestran que GST inhibiría acumulación de Tg y expresión de C/EBPß. Otros autores mostraron relación entre sulfataciones y la diferenciación de preadipocitos; postulamos que la enzima GST podría tener un papel todavía no descripto.ß se relativizó por actina y por CC. Su expresión mostró un máximo al día 4, observando en CD una expresión 3 veces mayor que en CC, mientras que GST provocaría una inhibición, al día 4, mayor al 50% (CD: 2.73 UA; CD + GST: 1.32 UA). GST también inhibió la acumulación de Tg en CD, diminuyendo un 31% la media obtenida (CD: 420 + 36 ug Tg/ ug ADN; CD + GST: 288 + 101 ug Tg/ ug ADN). Estos primeros resultados muestran que GST inhibiría acumulación de Tg y expresión de C/EBPß. Otros autores mostraron relación entre sulfataciones y la diferenciación de preadipocitos; postulamos que la enzima GST podría tener un papel todavía no descripto.
