INVESTIGADORES
CALVO Juan Carlos
congresos y reuniones científicas
Título:
Nuevas evidencias acerca del proceso de descondensación del espermatozoide humano in vivo.
Autor/es:
JULIANELLI VL; FARRANDO B; CALVO JC; CALVO L; ROMANATO M
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
La descondensación (desc) del núcleo espermático humano in vivo, ocurriría en presencia de glutatión (GSH) y heparán sulfato (HS). Demostramos presencia de HS en ovocitos maduros e inmaduros murinos. La desc cromatínica involucra tiorreducción de protaminas y su reemplazo por histonas ovocitarias. Se ha propuesto que estos procesos son sucesivos e independientes. Nuestros resultados previos por método indirecto sugieren que heparina (Hep), análogo del HS, coopera con GSH en la tiorreducción
durante la desc espermática humana in vitro. 1) Evaluar
presencia
de
HS
en
ovocitos
inmaduros
humanos
y
células
del
cúmulus
(cc) por inmunocitoquímica en pacientes (clínica de fertilidad con
CI firmado), utilizando anti-HS monoclonal y anti-IgM-FITC de
ratón.
2) Analizar efecto de Hep sobre tiorreducción cromatínica
durante
desc espermática humana in vitro por método directo. Núcleos
espermáticos
(donantes
OMS)
con
tiorreductor:
10mM
GSH
ó
0,1mM
DTT
30,
con
o
sin
Hep
(46uM)
durante
5.
Se
evaluó
estado
tiorreducido por tinción con reactivo tiólico cuantificando fluorescencia por Image J. Resultados 1) Localización citoplasmática
y nuclear de HS en ambos tipos celulares. 2) La exposición
a
los
tiorreductores
aumentó
intensidad
de
marca
en
núcleos
sin
cambiar
tamaño. El agregado de Hep favoreció desc. promoviendo
aparición
de núcleos mas grandes y menos marcados debido a
perdida
de protaminas. La intensidad de fluorescencia de núcleos
no
descondensados expuestos a GSH+Hep, aumentó respecto
al
GSH solo (113±7 vs 68±7 unidades arbitrarias; n=4; ANOVADunn).
Esto no se observó con DTT. Demostramos que en la desc
cromatínica
del espermatozoide humano in vitro,
la Hep actúa
como
aceptor de protaminas y favorece la tiorreducción de las
mismas
por el GSH. También, demostramos presencia de HS en
estadios
tempranos del desarrollo folicular humano. Esto correlacionaría
con el rol fundamental de esta molécula en el ovocito
para
asegurar
una
correcta
desc
y
así
una
fecundación
exitosa.