INVESTIGADORES
NERLI Bibiana Beatriz
congresos y reuniones científicas
Título:
ESTUDIO DE LA ESTABILIDAD TÉRMICA DE PROTEÍNAS PANCREÁTICAS EN PRESENCIA DE POLIETILENGLICOL POR MEDIDAS DE CALORIMETRÍA DIFERENCIAL DE BARRIDO.
Autor/es:
PELLEGRINI MALPIEDI, LUCIANA; TUBÍO, GISELA; LOH, WATSON; NERLI, BIBIANA
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; XXIX Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario.; 2009
Institución organizadora:
Sociedad de Biología de Rosario.
Resumen:
La tripsina (TRP) y quimotripsina (QTRP) son serin-proteasas que poseen una amplia gama de aplicaciones industriales. Nuestro grupo de investigación ha venido trabajando en el empleo de sistemas bifásicos acuosos (SBAs) formados por polietilénglicol (PEG) y sales, como método de extracción y purificación de dichas proteínas a partir de páncreas bovino, ya sea en sus formas enzimáticamente activas (TRP y QTRP) o como sus respectivos precursores: tripsinógeno (TRPz) y quimotripsinógeno (QTRPz). Dado que uno de los prerrequisitos que deben cumplir los SBAs, es preservar la estructura y actividad biológica de las proteínas blanco, se planteó como objetivo general, evaluar el efecto de la presencia del polímero de fase (PEG) sobre la estabilidad térmica de las proteínas en estudio. Mediante Calorimetría Diferencial de Barrido se obtuvieron los termogramas de las enzimas, disueltas en buffer de pH conveniente, en ausencia y presencia de PEGs (10 % P/P) de distintos pesos moleculares (600, 4000 y 8000). Los barridos fueron realizados en el rango de temperaturas 293-363 K empleando una velocidad de calentamiento constante de 60 K/h. Los termogramas fueron normalizados y la capacidad calorífica de exceso fue obtenida luego de la sustracción de la línea de base del buffer y de la capacidad calorífica de la proteína nativa. En todas las condiciones, las serin-proteasas  evidenciaron su transición térmica desde la forma nativa (N) hacia la desnaturalizada (D). El análisis de deconvolución de los termogramas  sugirió que para TRP, la desnaturalización transcurre siguiendo un modelo de dos estados, mientras que para QTRPz y QTRP, la transición N-D ocurre mediante dos pasos independientes, en concordancia a lo observado para otras proteínas globulares con dos dominios. El cálculo de la función de partición permitió estimar la fracción del intermediario presente. Para TRPz, la transición N-D transcurre en uno o dos pasos según el peso molecular del PEG ensayado, indicando que la presencia del polímero afecta la interacción interdominio y con ello el mecanismo de desnaturalización. La presencia de los diferentes PEGs disminuyó en forma significativa (4-13 K) la temperatura de desnaturalización de TRP y QTRP, pero no así la de TRPz y QTRPz (1- 4 K). Esto permite sugerir que la extracción de los zimógenos a partir de homogenado pancreático con SBAs, resulta más conveniente que la de sus formas enzimáticamente activas.