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Los sistemas bifásicos acuosos (SBAs) presentan creciente aplicación en el campo de la purificación de enzimas industriales por ser económicos y fácilmente escalables. La presencia de ligandos libres que interaccionen específicamente con la proteína de interés y cuyo equilibrio de reparto esté desplazado hacia una de las fases, puede incrementar la capacidad separativa de los sistemas. El objetivo de este trabajo fue caracterizar y evaluar las propiedades de reparto de SBAs formados por polietilenglicol (de pesos moleculares promedio 3350 y 8000) y citrato de sodio pH 5,20 (PEG/Cit) en presencia dos colorantes triazínicos libres: azul de Cibacron 3GA (CBB) y reactivo amarillo 2 (RY2). Se emplearon dos enzimas pancreáticas de uso difundido a nivel industrial: tripsina y quimotripsina (QTRP). Se obtuvieron los diagramas binodiales correspondientes a cada SBA en ausencia y presencia del colorante mediante titulación turbidimétrica. Los coeficientes de reparto de CBB y RY2 (KrCBB y KrRY2) se calcularon como el cociente de sus concentraciones en cada fase, determinadas a través de medidas de absorbancia a 618 y 407 nm respectivamente. Los coeficientes de reparto de las proteínas (KrTRP y KrQTRP) fueron calculados determinando sus actividades frente a sustratos específicos. Los resultados obtenidos mostraron que tanto el CBB como RY2 desplazan las curvas binodiales hacia los ejes coordenados en la zona correspondiente a concentraciones intermedias de polímero/sal, no así en los extremos donde las curvas se mostraron totalmente superponibles. Los gráficos de Lineweaver-Burk mostraron que tanto CBB como RY2 inhiben competitivamente a las proteasas sugiriendo que estos ligandos se unen específicamente a los sitios para sustrato. Por su lado el equilibrio de reparto de estos colorantes está marcadamente desplazado hacia la fase rica en polímero con Krs del orden de 103 para CBB y 102 RY2. La presencia de CBB hasta un 5 % de la concentración total de polímero prácticamente no modificó el equilibrio de reparto de TRP mientras que RY2 en igual proporción prácticamente duplicó los valores de KrTRP y triplicó KrQTRP, Este comportamiento diferencial entre ambos colorantes mostraría que a pesar de sus similitudes estructurales, CBB y RY2 presentan diferentes mecanismos de interacción con la proteína. Se concluye que la presencia de RY2 en los SBAs PEG/Cit constituye una herramienta útil que puede direccionar el reparto de las proteasas TRP y QTRP hacia la fase rica en polímero, incrementando la selectividad del SBA.CBB y KrRY2) se calcularon como el cociente de sus concentraciones en cada fase, determinadas a través de medidas de absorbancia a 618 y 407 nm respectivamente. Los coeficientes de reparto de las proteínas (KrTRP y KrQTRP) fueron calculados determinando sus actividades frente a sustratos específicos. Los resultados obtenidos mostraron que tanto el CBB como RY2 desplazan las curvas binodiales hacia los ejes coordenados en la zona correspondiente a concentraciones intermedias de polímero/sal, no así en los extremos donde las curvas se mostraron totalmente superponibles. Los gráficos de Lineweaver-Burk mostraron que tanto CBB como RY2 inhiben competitivamente a las proteasas sugiriendo que estos ligandos se unen específicamente a los sitios para sustrato. Por su lado el equilibrio de reparto de estos colorantes está marcadamente desplazado hacia la fase rica en polímero con Krs del orden de 103 para CBB y 102 RY2. La presencia de CBB hasta un 5 % de la concentración total de polímero prácticamente no modificó el equilibrio de reparto de TRP mientras que RY2 en igual proporción prácticamente duplicó los valores de KrTRP y triplicó KrQTRP, Este comportamiento diferencial entre ambos colorantes mostraría que a pesar de sus similitudes estructurales, CBB y RY2 presentan diferentes mecanismos de interacción con la proteína. Se concluye que la presencia de RY2 en los SBAs PEG/Cit constituye una herramienta útil que puede direccionar el reparto de las proteasas TRP y QTRP hacia la fase rica en polímero, incrementando la selectividad del SBA.3 para CBB y 102 RY2. La presencia de CBB hasta un 5 % de la concentración total de polímero prácticamente no modificó el equilibrio de reparto de TRP mientras que RY2 en igual proporción prácticamente duplicó los valores de KrTRP y triplicó KrQTRP, Este comportamiento diferencial entre ambos colorantes mostraría que a pesar de sus similitudes estructurales, CBB y RY2 presentan diferentes mecanismos de interacción con la proteína. Se concluye que la presencia de RY2 en los SBAs PEG/Cit constituye una herramienta útil que puede direccionar el reparto de las proteasas TRP y QTRP hacia la fase rica en polímero, incrementando la selectividad del SBA.

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