INVESTIGADORES
NERLI Bibiana Beatriz
congresos y reuniones científicas
Título:
ESTUDIO DEL PERFIL DE REPARTO DE TRIPSINÓGENO Y QUIMOTRIPSINÓGENO EN SISTEMAS BIFÁSICOS ACUOSOS FORMADOS POR POLIETILENGLICOL Y TARTRATO DE SODIO.
Autor/es:
PELLEGRINI MALPIEDI, LUCIANA; PICÓ, GUILLERMO; NERLI, BIBIANA
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; XXVIII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2008
Institución organizadora:
Sociedad de Biología de Rosario
Resumen:
La extracción líquido-líquido con sistemas bifásicos acuosos (SBAs) constituye una operación unitaria de creciente empleo en diferentes protocolos de purificación. Debido a que los SBAs más empleados son los constituídos por polietilenglicol (PEG) y fosfato de sodio, que impactan en el medio-ambiente, resulta de interés desarrollar SBAs más amigables que puedan reemplazarlos. En trabajos previos, hemos estudiado las propiedades de reparto de SBAs formados por polietilenglicol (PEG) y una sal de anión biodegradable, el citrato de sodio (NaCit). Más recientemente, hemos caracterizado los equilibrios líquido-líquido de un nuevo SBA formado por PEG y tartrato de sodio (PEG/NaTart). El objetivo de este trabajo fue evaluar la aplicabilidad de diferentes SBAs PEG/NaTart a la purificación de tripsinógeno (TRPz) y quimotripsinógeno bovinos (QTRPz), dos zimógenos pancreáticos de difundida aplicación industrial Se emplearon SBAs formados por PEGs de diferentes pesos moleculares promedio: 600, 1000, 2000, 4000, 6000 y 8000; con distintas composiciones totales iniciales de polímero y sal. En todos los casos se trabajó a pH regulado en 5,00. El coeficiente de reparto (Kr) de cada proteína se obtuvo a partir del cociente de las concentraciones proteicas en cada fase, determinadas por medidas de absorbancia a 280 nm.  La selección de los SBAs con mejor capacidad separativa se realizó a través del cálculo de los valores teóricos de rendimiento (R) y pureza (P). En la mayoría de los SBAs, TRPz presentó valores de Kr menores a los de QTRPz, indicando que el equilibrio de reparto se halla más desplazado hacia la fase rica en sal. Por otro lado, se observó que los valores de Kr disminuyen al incrementarse el tamaño del polímero y que los mismos resultan ser sensibles a la concentración de PEG y NaTart. La presencia de NaCl no aumentó significativamente la selectividad de ningún SBA, verificándose resultados similares en relación al efecto del cociente de volúmenes de fase. Los resultados obtenidos mostraron que los SBAs formados por PEGs de peso molecular 2000 y 4000, con composiciones totales intermedias y una relación unitaria de volúmenes de fase, permitirían recuperar entre el 70-90 % de las proteínas con una pureza próxima al 70 %. Estos valores pueden considerarse promisorios para la ulterior aplicación de los SBAs PEG/NaTart a la purificación de TRPz y QTRPz a partir de páncreas bovino, fuente natural de los zimógenos.