Reparto de proteínas del veneno de Bothrops alternatus en sitema Bifásico acuoso PEG - Fosfato

GOMEZ, GABRIELA; LEIVA, LAURA; PICÓ, GUILLERMO; NERLI, BIBIANA; FARRUGGIA BEATRIZ; ACOSTA, OFELIA

FaCENA - UNNE - Corrientes, Argentina

Jornada; VIII Jornadas Científicas de Estudiantes de Bioquímica; 2005

Sociedad Científica de Estudiantes de Bioquímica (SOCEB) - FaCENA UNNE

En la actualidad, ha crecido la aplicación farmacológica de ciertos componentes proteicos de venenos ofídicos, como así también su empleo como reactivos analíticos. La metodología vigente para su purificación es la cromatografía en columna. Sin embargo, es de interés disponer de técnicas menos costosas, con mayor capacidad de muestra a procesar. Así, la biotecnología de aislamiento de proteínas, mediante reparto en sistemas bifásicos acuosos resulta una opción con potencial aplicación en venenos ofídicos. El objetivo de este trabajo fue evaluar el reparto de los principales componentes proteicos del veneno de Botrhops alternatus - yarará grande- (metaloproteasas, fosfolipasas y enzimas del tipo trombinas) en un sistema PEG 3300 –fosfato. El SBA se preparó por gravimetría (12,3 – 13,7 - 74 %w/w de fosfato, PEG3300 y agua respectivamente) obteniéndose dos fases acuosas (TOP, superior , y BOTTOM, inferior). La adición del veneno y posterior agitación, permitió el reparto de sus componentes en ambas fases. Se testeó la actividad de las distintas enzimas en cada fase, en el reparto inicial, y en cada una de las renovaciones de fase TOP que se practicaron (tres). La trombina se distribuyó preferentemente en la fase BOTTOM, las proteasas mostraron tendencia a repartirse en ambas fases, y las fosfolipasas exhibieron mayor afinidad por la TOP. Así, las renovaciones de fase TOP redujo el contenido de proteasas, y más sensiblemente el de fosfolipasas en la fase BOTTOM. Se concluye que esta metodología innovadora es potencialmente aplicable para el aislamiento de la enzima con actividad coagulante presente en el veneno de B. alternatus.