Determinar y establecer parámetros de crecimiento de el/los microorganismos responsables de producir manchas en envases de poliestireno expandido.

CASTIGLIA VALERIA; KUHAR FRANCISCO; RAMOS MARCELA

2013-06-01/2013-06-20

1-5

organizacional

Quimica

Objetivo    Determinar y establecer parámetros de crecimiento de el/los microorganismos responsables de producir manchas en envases de poliestireno expandido.      Toma de muestras    Se realizaron dos visitas a la fábrica, en cada una de ellas se tomaron muestras de materia prima, de poliestireno preexpandido (proveniente del lecho de secado y del silo (material tipo 413)), de productos terminados, de líquido desincrustante y de agua en distintas etapas del proceso.       Procesamiento de las muestras    Las muestras líquidas fueron diluidas y plaqueadas en cajas de petri con medio de cultivo e incubadas en cámara de cultivo durante 7 días a 28°C.  Las muestras de materia prima y de poliestireno preexpandido fueron separadas en dos lotes, uno de los cuales fue esterilizado superficialmente con alcohol 70% e hipoclorito de sodio 2% a fin de obtener únicamente cultivos de microorganismos que pudieran encontrarse en el interior del material. Luego se sembraron ambos lotes en cajas de petri con medio de cultivo.  En los productos terminados de polipropileno expandido se observaron 3 tipos de manchas de distinta coloración: rosa, marrón y negra.  A fin de promover el crecimiento de el/los microorganismos causantes de estas manchas se tomaron muestras del material afectado y se incubaron en cámara húmeda durante 15 días al cabo de los cuales se registró el aspecto y tamaño de las manchas para comprobar signos de crecimiento.  Por otro lado se realizó una esterilización superficial de las zonas manchadas de productos terminados y se tomaron muestras a dos profundidades distintas (1/2 y 1 cm), estas muestras fueron sembradas en cajas de petri e incubadas durante 15 días en cámara de cultivo a 28°C.  Todos los cultivos fueron monitoreados diariamente y las colonias obtenidas fueron observadas al microscopio (LM) y fotografiadas a fin de determinar la identidad de el/los microorganismos presentes.    Para caracterizar el crecimiento del microorganismo hallado se realizaron ensayos de muerte térmica a distintas temperaturas y de superviviencia a distintos pH.  Dado que los microorganismos suelen tener estructuras (por ejemplo esporas) que resisten diferencialmente un aumento de temperatura, el ensayo de muerte térmica se realizó mediante dos técnicas distintas: en medio liquido (agua estéril) utilizando solo las esporas y en medio de cultivo agarizado utilizando el micelio completo. En la primera de ellas se tomó un cultivo puro del microorganismo y se levantaron las esporas con agua estéril, luego esta solución fue fraccionada y sometida durante distintos intervalos de tiempo a cuatro temperaturas (50, 65, 80 y 100°C) utilizando baños térmicos, después de esto las muestras fueron enfriadas y plaqueadas en cajas con medio de cultivo. La segunda técnica consistió en someter cultivos en medio agarizado del micoorganismo a distintos tiempos en tres estufas (37, 50 y 80°C) y luego repicar la colonia a un nuevo medio de cultivo para comprobar su viabilidad.    Adicionalmente se realizaron dos ensayos de resistencia a desinfectantes, uno con peroxido de hidrogeno y otro con hipoclorito de sodio, para determinar a cuál de estas sustancias y a que concentración es sensible el microorganismo hallado. Para ello se sometieron tacos de agar colonizados con el microorganismo en cuestión a la acción de ambos desinfectantes por separado en distintas concentraciones y durante diferentes intervalos de tiempos. Luego los tacos fueron retirados y sembrados en placas con medio de cultivo que fueron incubadas durante 7 días a 28 °C.    En todos los casos se utilizo como medio de cultivo MEA (12,7 g extracto de malta, 10 g glucosa, 20 g agar por litro de agua).