INMIBO ( EX - PROPLAME)   14614
INSTITUTO DE MICOLOGIA Y BOTANICA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Potencial biotecnológico de hongos filamentosos productores de tirosinasas aislados de Las Yungas tucumanas para la producción de L-Dopa
Autor/es:
LECHNER BE; PERALTA MP; FARIÑA JI
Lugar:
Lima
Reunión:
Congreso; IX Congreso Latinoamericano de Micología; 2017
Institución organizadora:
Asociación Latinoamericana de Micología
Resumen:
La enzima tirosinasa, (TYR) EC 1.14.18.1, seencuentra ampliamente distribuida en toda la escala filogenética. En estetrabajo, nos hemos centrado en su producción utilizando hongos filamentososnativos de Las Yungas tucumanas. Esta ecorregión es un área prioritaria para laconservación, y por talmotivo, esta investigación pretende contribuir a la valoración de la misma, haciendo hincapié en el descubrimiento de hongos filamentososcon potencial para la producción de TYR y L-Dopa (L-3,4 dihidroxifenilalanina),esta última, producto de la biotransformación de L-tirosina por acción de lasTYRs. Para seleccionar organismos hiperproductores, se llevó a cabo un screeninga partir de 40 ejemplares de la micoteca de Las Yungas (Lab. Micodiversidad yMicoprospección, PROIMI-CONICET), que habían sido pre-seleccionadosmediante un método cualitativo como productores de TYRs. Para evaluar laproducción de TYRs de forma cuantitativa, dichos aislamientos fueron crecidos en dos medios deproducción: 1) no inductor, Czapek-Dox Agar (CDA), para determinar laproducción TYRs basales y, 2) inductor, Czapek-Dox Agar Enriquecido (ECA), deigual composición al CDA pero suplementado con CuSO4·5H2O(0,004% p/v) y L-tirosina (2% p/v). Para cada condición de cultivo seobtuvieron dos extractos crudos: 1) un lisado celular resultante de la homogeneizacióncon el disruptor celular ?BeadBeater? y 2), un exudado obtenido mediante dosetapas de congelamiento-descongelamiento. Con ambos se llevó a cabo la determinación cuantitativa de lasactividades monofenolasa y difenolasa de la enzima tirosinasa, mediante elmétodo del Dopacromo, utilizando como intermediario MBTH (5 mM), CuSO4 (0,04mM) como cofactor, y L-Tyr (8 mM) o L-DOPA (8 mM) como sustratos, según laactividad cuantificada (mono- o difenolasa). Del total de hongos evaluados, seseleccionaron 8 aislamientos como hiperproductores de TYRs, los que fueron comparados posteriormente según sucapacidad para sintetizar L-Dopa en cultivo sumergido y bajo condicionesoperativas controladas. Acorde a lo ensayado, el aislamiento LY 38.7 fue el máspromisorio, teniendo en cuenta los títulos de L-Dopa (178,84 mg/L al cabo de 96h) y los valores de actividad TYR monofenolasa y difenolasa (21,36 UE/L  y 23,37 UE/L, respectivamente, al cabo de  96 h).