supresoras mieloides durante la infección experimental aguda con Trypanosoma cruzi: Estudio de mecanismos involucrados en la supresion

AROCENA AA PELLEGRINI AA PAROLI AA ONOFRIO LL CANO RCC AOKI PP GEA SS

Ascochinga

Congreso; XXIV Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Protozoología; 2010

Las células supresoras mieloides (CSM) constituyen una población heterogénea que se expande durante procesos inflamatorios como en el cáncer y las infecciones. Se caracterizan por presentar los marcadores de superficie Gr1-CD11b y por suprimir la respuesta de células T. Se ha reportado que la supresión puede ser realizada por diferentes mecanismos. Entre ellos, mediante la producción de especies reactivas del oxigeno (ROS) activando el complejo NADPH oxidasa,  la activación de oxido nítrico(ON) sintetaza inducible y/o arginasa-1. Previamente en nuestro grupo se detecto un incremento significativo de CSM de hígado y bazo de ratones BALB/c, infectados con 1000 tripomastigotes, a los 21 días post infección (dpi) en comparación con ratones sin infectar. El objetivo del presente trabajo fue analizar si la expansión de estas células genera una supresión de la respuesta proliferativa de células T frente a Concavalina A y determinar los posibles mecanismos que estarían participando en dicha supresión. El número de células CD11b+Gr1+ de leucocitos purificados de hígado y esplenocitos se determino por citometría de flujo. Se observó que los porcentajes de estas células a los 21 dpi en bazo fueron de 23 ± 2,9 vs 2,25 ± 0,15 del grupo control.  Los porcentajes  de CSM de hígado fueron 25,6 ± 3,5 vs 0,27 ± 0,1 del control. También se observó una disminución significativa de la proliferación de esplenocitos totales frente a Con A, 6680±1045cpm vs 61829 ± 6821cpm obtenida con los controles. Con el propósito de analizar si esta supresión podría estar mediada por CSM, se realizaron ensayos de proliferación de esplenocitos de animales sin infectar agregando CSM purificadas de esplenocitos de ratones de 21 dpi. El agregado de CSM en una proporción de 1:2 produjo un descenso significativo de la proliferación (35030±2606). El análisis de la producción de ROS por citometría de flujo mediante el uso de una sonda fluorescente H2DCFDA demostró que el total de la población CD11b+Gr1+ produce ROS (IFM: 148,1±12,72). Para determinar la presencia de ON producido por la población CD11b+Gr1+por citometría, se utilizo DAF-2DA para la cual la coloración de las CSM fue positiva (IFM: 265,5±16,9). Además, se investigo la activación del complejo NADPH en CSM purificadas por sorter, a los 21 dpi, mediante el análisis de las sub-unidades p47 y gp 91 por W. Blot. Se detecto una fuerte expresión de la proteína p47 comparadas con el lisado de CSM controles. En conclusión, las CSM inducidas por la infección con T.cruzi, generan supresión de la respuesta de células T mediante múltiples mecanismos