EL FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN TIPO KRÜPPEL 6 (KLF6) MODULA LA DIFERENCIACIÓN DE LAS CÉLULAS PLACENTARIAS EXTRAVELLOSAS

RACCA A.; GENTI-RAIMONDI S; KOURDOVA L. T; ROJAS L; MIRANDA A.L.; CRUZ DEL PUERTO M.M; PANZETTA-DUTARIA GM

Congreso; IV REUNIÓN CONJUNTA DE SOCIEDADES DE BIOLOGÍA DE LA REPÚBLICA ARGENTINA; 2020

Las células trofoblásticas de la placenta son fundamentales en el desarrollo de un embarazo saludable. En las vellosidades de anclaje, los trofoblastos extravellosos se diferencian desde un fenotipo proliferativo a uno invasivo, migran hacia la decidua e invaden el endometrio y parte del miometrio o adquieren un fenotipo vascular que penetra y remodela las arterias uterinas. Alteraciones en estos procesos se asocian a patologías como la preeclampsia y placentas cretas. Previamente se ha determinado la relevancia de KLF6 en la placenta. Ratones Klf6 -/- mueren al día E12.5 mostrando un deterioro en el desarrollo placental y su silenciamiento in vitro en células de placenta humana interfiere con la diferenciación del trofoblasto velloso. Además, el nivel de expresión de KLF6 se encuentra incrementado en el lecho placentario de embarazos con preeclampsia respecto a embarazos saludables. El objetivo de este trabajo fue evaluar la participación de KLF6 en la diferenciación del trofoblasto humano extravelloso. Con este fin, se usó la línea celular HTR8/SVneo la cual fue transfectada transientemente con un siRNA específico para KLF6 o con un siRNA control; o fue transducida de manera estable con un lentivirus recombinante que expresa una mutante de KLF6 que carece de su dominio ácido de transactivación (pLenti-KLF6∆ac). En las condiciones mencionadas, se evaluó la migración mediante ensayos de cierre de herida y transwell, y se analizó el cambio morfológico mediante microscopia de contraste de fase y de fluorescencia. En células silenciadas para KLF6 y su control se evaluó la expresión de moléculas asociadas a la diferenciación del trofoblasto extravelloso mediante Western Blot, la actividad de la metaloproteinasa 9 (MMP9) mediante ensayos de zimografía y la localización del centro organizador de microtúbulos (MTOC) mediante inmunomarcación con γ-tubulina. El silenciamiento de KLF6 así como la expresión de la mutante pLenti-KLF6∆ac que carece de actividad transcripcional pero mantiene su capacidad de unirse a secuencias de DNA blanco, condujo a una mayor migración y a un cambio morfológico compatible con una transformación epitelio mesenquimal. En las células con expresión disminuida de KLF6 se observó un aumento en varios marcadores de diferenciación, una mayor actividad de MMP9 y un aumento en el porcentaje de células con MTOC orientado hacia el frente de migración. Los resultados sugieren que KLF6 modula la diferenciación del trofoblasto extravelloso hacia un fenotipo migratorio dado que la disminución en su expresión o el bloqueo de su función favorecen la migración celular y la expresión de marcadores asociados a diferenciación.