ROL DE KLF6 EN LA HOMEOSTASIS DEL RETÍCULO ENDOPLÁSMICO

KOURDOVA L. T; ROJAS L; PANZETTA-DUTARIA GM; RACCA A.; GENTI-RAIMONDI S; MIRANDA A.L.; CRUZ DEL PUERTO M.M

Congreso; III REUNIÓN CONJUNTA DE SOCIEDADES DE BIOLOGÍA DE LA REPÚBLICA ARGENTINA; 2019

El factor de transcripción Krüppel-like factor 6 (KLF6) , principalmente estudiado por su función de supresor tumoral, puede tanto activar como inactivar genes dependiendo del microambiente celular. En la placenta, KLF6 activa la expresión de moléculas claves y su silenciamiento perjudica la fusión del trofoblasto velloso. La placenta es un órgano que posee numerosas similitudes con un proceso tumoral, tales como: desarrollo en ambiente con baja tensión de oxígeno, alta tasa de proliferación, invasión del tejido huésped y modulación inmune. Además, en determinadas condiciones, las células trofoblásticas y tumorales deben adaptarse a una elevada actividad sintética y secretoria, a cambios en el balance redox o en los niveles de calcio debiendo activar la respuesta de proteínas mal plegadas (UPR) para reestablecer la homeostasis del retículo endoplásmico (RE) o para eliminar las células que no pueden recuperarse del daño producido por el estresor. Por lo tanto, la correcta expresión y función de los componentes de UPR desempeñan un rol central en el control del destino celular. De hecho, numerosas patologías del embarazo se asocian a una mala adaptación de UPR. En estudios previos demostramos que el silenciamiento de KLF6 conduce a un incremento en las especies reactivas de oxígeno (ROS) en la línea celular HTR-8/SVneo, modelo de estudio del trofoblasto extravelloso humano. Dado que ROS es un disparador de UPR, evaluamos la participación de KLF6 en este proceso. Las células fueron transfectadas de manera transiente con siRNAs específicos para KLF6 o con un siRNA control. Mediante ensayos de western blot y/o RT-PCR a tiempo real y RT-PCR y separación en gel de poliacrilamida, analizamos los niveles de expresión de chaperonas residentes del RE: proteína de unión a inmunoglobulinas (BiP/GRP78); las lecitinas calnexina y calreticulina; y las enzimas proteína disulfuro isomerasa (PDI) y oxidoreductasa 1 alfa del ER (ERO1α). Además, evaluamos la activación de dos de las tres vías que participan en UPR: IRE1α, a través del procesamiento del mensajero de la proteína 1 de unión a la caja X (XBP1) y de la expresión del gen miembro B9 de la familia (Hsp40) de proteínas de choque térmico DNAJ (DNAJB9); y la vía de la proteinquinasa del retículo endoplasmático similar a PKR (PERK), mediante el nivel de fosforilación del factor eucariótico de iniciación 2 α (eIF2α). Se demostró que la disminución en los niveles de KLF6 por 72 h conduce a una disminución en los niveles de BiP, calnexina e IRE1α. Además, inhibe esta vía, sin alterar la vía de PERK. El tratamiento con 1 nM de tapsigargina por 24 h, estresor conocido del RE, provoca el aumento esperado en BiP en células tratadas con el siRNA control, mientras que el silenciamiento de KLF6 interfiere con dicho aumento y con la activación de la vía de IRE1α. Sin embargo, el RE es capaz de responder, activándose la vía de PERK. Este estudio revela por primera vez que KLF6 es un regulador de la UPR y permite postular que, al menos en parte, su rol en la placenta y en la transformación tumoral se asocia a su participación en la homeostasis del ER.