Efecto de la entomotoxina vegetal JBU (Jack Bean Urease) sobre la expresión y actividad de catepsina D en el insecto hematófago Dipetalogaster maxima (Hemiptera: Reduviidae

MOYETTA, NATALIA, R.; CARLINI, C.R.; LEYRIA, JIMENA.; CANAVOSO, LILÍAN E.; RAMOS, FABIAN O.

Córdoba

Congreso; XXII Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología de Córdoba; 2019

Sociedad de Biología de Córdoba

Catepsina D (CatD) es una aspártico endopeptidasa lisosomal que participa en distintos procesos fisiológicos. En insectos, CatD participa en la digestión, mecanismos de defensa, metamorfosis y reproducción. Por otro lado, las ureasas son metaloenzimas que catalizan la ruptura de la urea en dióxido de carbono y amoníaco. JBU (?Jack Bean Urease?) es la principal isoforma de la ureasa obtenida a partir de las semillas de la leguminosa Canavalia ensiformis. JBU ha sido propuesta como una proteína ?moonlighting?, presentando efectos fungi y entomotóxicos independientes de su actividad catalítica. En este trabajo, se utilizaron ninfas del quinto estadio (NV) del vector de la enfermedad de Chagas Dipetalogaster maxima como modelo experimental con el objetivo de analizar el efecto de JBU sobre la expresión y actividad de CatD, contribuyendo a dilucidar el mecanismo de acción de la toxina. Los resultados de los ensayos de inmunofluorescencia revelaron un patrón de distribución amplio para CatD de D. maxima (DmCatD) en intestino anterior y posterior, cuerpo graso y hemocitos. Sin embargo, la señal para DmCatD fue más abundante en la región apical y basal de los enterocitos. Cuando la expresión de DmCatD fue analizada por Western blot se observó una banda correspondiente a la forma activa de la enzima (25 kDa) en el cuerpo graso, intestino anterior y posterior. En tanto, pro-CatD (43 kDa) fue visualizada sólo en hemocitos y hemolinfa. Aunque el transcripto de DmCatD se expresó en todos los tejidos analizados, los niveles más altos fueron detectados en el intestino anterior. Por otro lado, las inyecciones de una dosis subletal de JBU (0,125 µg/mg peso del insecto) indujeron un incremento significativo en la actividad de la enzima en homogenatos de intestino posterior (3 h post-inyección) y en la hemolinfa (18 h post-inyección). Este aumento fue independiente de los niveles de expresión de la enzima cuando ésta fue analizada a nivel transcripcional y proteico. Tampoco fueron observados cambios en la distribución de la enzima en los tejidos. Los experimentos de incubación in vitro dirigidos a estudiar una acción directa de la toxina sobre la actividad enzimática sugirieron que el efecto sobre DmCatD es tejido-específico. Analizados en conjunto, este estudio constituye el primer reporte que señala a DmCatD como un blanco molecular de JBU, ampliando de esta manera nuestro conocimiento acerca del mecanismo de acción de la toxina