Rol de KLF6 en la homeostasis del retículo endoplásmico

ANDREA MIRANDA; MARIANO CRUZ DEL PUERTO; ANA RACCA; SUSANA GENTI DE RAIMONDI; LUCILE KOURDOVA; MARÍA LAURA ROJAS; GRACIELA PANZETTA DE DUTARI

Córdoba

Jornada; XXII Jornadas Científicas de la Sociedad de Biología de Córdoba; 2019

Sociedad de Biología de Córdoba

El factor de transcripción Krüppel-like factor 6 (KLF6), principalmente estudiado por su función de supresor tumoral, puedetanto activar como inactivar genes dependiendo del microambiente celular. En la placenta, KLF6 activa la expresión demoléculas claves y su silenciamiento perjudica la fusión del trofoblasto velloso. La placenta es un órgano que poseenumerosas similitudes con un proceso tumoral, tales como: desarrollo en ambiente con baja tensión de oxígeno, alta tasa deproliferación, invasión del tejido huésped y modulación inmune. Además, en determinadas condiciones, las célulastrofoblásticas y tumorales deben adaptarse a una elevada actividad sintética y secretoria, a cambios en el balance redox o enlos niveles de calcio, debiendo activar la respuesta de proteínas mal plegadas (UPR) para reestablecer la homeostasis delretículo endoplásmico (RE) o para eliminar las células que no pueden recuperarse del daño producido por el estresor. Por lotanto, la correcta expresión y función de los componentes de UPR desempeñan un rol central en el control del destino celular.De hecho, numerosas patologías del embarazo se asocian a una mala adaptación de UPR. En estudios previos demostramosque el silenciamiento de KLF6 conduce a un incremento en las especies reactivas de oxígeno (ROS) en la línea celular HTR8/SVneo, modelo de estudio del trofoblasto extravelloso humano. Dado que ROS es un disparador de UPR, evaluamos laparticipación de KLF6 en este proceso. Las células fueron transfectadas de manera transiente con siRNAs específicos paraKLF6 o con un siRNA control. Mediante ensayos de western blot y/o RT-PCR a tiempo real y RT-PCR y separación en gel depoliacrilamida, analizamos los niveles de expresión de chaperonas residentes del RE: la proteína de unión a inmunoglobulinas(BiP/GRP78); las lecitinas calnexina y calreticulina; y las enzimas proteína disulfuro isomerasa (PDI) y oxidoreductasa 1 alfadel ER (ERO1α). Además, evaluamos la activación de dos de las tres vías que participan en UPR: IRE1α, a través delprocesamiento del mensajero de XBP1 y de la expresión del gen DNAJB9; y la vía de la proteína quinasa del retículoendoplasmático similar a PKR (PERK), mediante el nivel de fosforilación del factor eucariótico de iniciación 2 α (eIF2α). Sedemostró que la disminución en los niveles de KLF6 por 72 h conduce a una disminución en los niveles de BiP, calnexina eIRE1α, sin alterar la vía de PERK. El tratamiento con 1 nM de tapsigargina por 24 h, conocido estresor del RE, provoca elaumento esperado de BiP en células tratadas con el siRNA control. Mientras que el silenciamiento de KLF6 impide dichoaumento e inhibe la activación de la vía de IRE1α. Sin embargo, el RE es capaz de responder activando la vía de PERK. Esteestudio revela por primera vez que KLF6 es un regulador de la UPR y permite postular que, al menos en parte, su rol en laplacenta y en la transformación tumoral se asocia a su participación en la homeostasis del RE. Subsidiado por FONCyT ySECyT-UNC.