Factores Solubles Derivados de Células de Carcinoma Anaplásico Tiroideo Polarizan Monocitos Humanos hacia un Fenotipo Pro-tumoral mediante la Regulación de la Vía de Señalización IL-6/STAT3

PARK SUNMI; NICOLA JUAN PABLO; PELLIZAS CLAUDIA GABRIELA; FOZZATTI LAURA; GEYSELS ROMINA; CHENG SHEUE-YANN; STEMPIN, CINTHIA; ACOSTA RODRIGUEZ EVA

Córdoba

Jornada; XXI Jornada Anual Científica de la Sociedad de Endocrinología y Metabolismo de Córdoba; 2019

Sociedad de Endocrinología y Metabolismo de Córdoba

El Cáncer de Tiroides representa la neoplasia endócrina más común. Los tumores diferenciados tienen buen pronóstico; no obstante algunos pueden progresar hacia fenotipos más agresivos como el Carcinoma Anaplásico Tiroideo (ATC). Muchos estudios han reconocido la interacción entre los diferentes tipos de células y el tejido circulante dentro del tumor, conocido como microambiente tumoral (TME), crucial en los procesos de progresión tumoral. Los macrófagos (M) constituyen el mayor componente del mismo. Los M se clasifican en dos grandes grupos en función de su estado de activación: M1 (anti-tumoral) y M2 (pro-tumoral). Dentro del TME son llamados Macrófagos Asociados a Tumores (TAMs) y presentan un fenotipo M2. En pacientes con ATC fue observada una incrementada densidad de TAMs y esto fue correlacionado con una disminución de la sobrevida e incremento en el tamaño tumoral. Sin embargo, el fenotipo y funcionalidad de los TAMs en el ATC es desconocida.El objetivo de nuestro trabajo fue explorar el impacto de factores solubles secretados por células derivadas de ATC humano sobre la modulación del fenotipo y funcionalidad de monocitos humanos. Células THP-1 (monocitos humanos) fueron cultivadas con medios condicionados (MC) derivados de células de ATC (MC-ATC) y los cambios fenotípicos explorados. Evidenciamos un incremento significativo en la expresión de marcadores M2 en células THP-1 luego del tratamiento con MC-ATC [RT-qPCR y Western Blot (WB)]. Por el contrario, no encontramos diferencias significativas en los niveles de marcadores M1 clásicos. Evaluamos el efecto sobre la proliferación y progresión del ciclo celular en células THP-1. Encontramos una redución significativa en el número de células junto con un incremento en las fases G0/G1 acompañado por una disminución en la fase S luego del tratamiento con los MC-ATC (Citometría de Flujo, CT), confirmando la reducción en la proliferación celular. Por otro lado observamos un aumento significativo en los niveles de expresión y secreción de la citoquina pro-inflamatoria 6 (IL-6) en monocitos luego del tratamiento con MC-ATC (WB y ELISA). Dado que IL-6 es un activador de la vía de señalización de STAT3, analizamos los niveles de fosforilación de este factor de transcripción. Evidenciamos un incremento significativo en su activación en células THP-1 luego del tratamiento con los MC-ATC (WB). Estudios bioinformáticos demostraron una relación entre la alta expresión de genes blanco de STAT3 con una menor sobrevida en pacientes con ATC. Por otro lado, evaluamos el rol funcional de factores solubles liberados por M activados, sobre la migración celular tiroidea. La capacidad migratoria de células de cáncer papilar de tiroides (K1 y TPC-1) incrementó luego del tratamiento con MC derivados de células THP-1 (MC-THP-1) tratadas con MC-ATC, en comparación con los MC-THP-1 controles (Cierre de Herida). Analizamos los cambios en la proliferación de linfocitos T (Células Jurkat) en co-cultivos con células THP-1 previamente tratadas con MC-ATC. Encontramos una disminución significativa en la proliferación de células Jurkat (CT). Analizamos los posibles mediadores solubles responsables de estos efectos mediante arreglos comerciales de citoquinas. El análisis reveló incremento selectivo en los niveles de expresión de proteínas involucradas en progresión tumoral junto con una disminución en citoquinas involucradas en la activación de células T en los MC-THP-1, en comparación con los MC de THP-1 control. En conclusión, nuestros resultados aportaron evidencias de la reprogramación fenotípica y funcional de monocitos por efecto de factores solubles liberados por células de ATC, favoreciendo el proceso de progresión tumoral tiroidea. La profundización de este conocimiento proporcionará nuevas evidencias sobre la etiología del ATC y contribuirá a delinear nuevas estrategias de diagnóstico permitiendo la optimización del tratamiento y un avance hacia la terapia personalizada de pacientes con ATC.