Rol de KLF6 en la homeostasis del retículo endoplásmico

MIRANDA AL; CRUZ DEL PUERTO MMA; RACCA AC; GENTI-RAIMONDI S; KOURDOVA LT; ROJAS ML; PANZETTA DE DUTARI GM

cordoba

Congreso; XXII Jornadas de la Sociedad de Biología de Córdoba; 2019

Sociedad de Biología de Córdoba

El factor de transcripción Krüppel-like factor 6 (KLF6), principalmente estudiado por su función de supresor tumoral, puede tanto activar como inactivar genes dependiendo del microambiente celular. En la placenta, KLF6 activa la expresión de moléculas claves y su silenciamiento perjudica la fusión del trofoblasto velloso. La placenta es un órgano que posee numerosas similitudes con un proceso tumoral, tales como: desarrollo en ambiente con baja tensión de oxígeno, alta tasa de proliferación, invasión del tejido huésped y modulación inmune. Además, en determinadas condiciones, las células trofoblásticas y tumorales deben adaptarse a una elevada actividad sintética y secretoria, a cambios en el balance redox o en los niveles de calcio, debiendo activar la respuesta de proteínas mal plegadas (UPR) para reestablecer la homeostasis del retículo endoplásmico (RE) o para eliminar las células que no pueden recuperarse del daño producido por el estresor. Por lo tanto, la correcta expresión y función de los componentes de UPR desempeñan un rol central en el control del destino celular. De hecho, numerosas patologías del embarazo se asocian a una mala adaptación de UPR. En estudios previos demostramos que el silenciamiento de KLF6 conduce a un incremento en las especies reactivas de oxígeno (ROS) en la línea celular HTR-8/SVneo, modelo de estudio del trofoblasto extravelloso humano. Dado que ROS es un disparador de UPR, evaluamos la participación de KLF6 en este proceso. Las células fueron transfectadas de manera transiente con siRNAs específicos para KLF6 o con un siRNA control. Mediante ensayos de western blot y/o RT-PCR a tiempo real y RT-PCR y separación en gel de poliacrilamida, analizamos los niveles de expresión de chaperonas residentes del RE: la proteína de unión a inmunoglobulinas (BiP/GRP78); las lecitinas calnexina y calreticulina; y las enzimas proteína disulfuro isomerasa (PDI) y oxidoreductasa 1 alfa del ER (ERO1α). Además, evaluamos la activación de dos de las tres vías que participan en UPR: IRE1α, a través del procesamiento del mensajero de XBP1 y de la expresión del gen DNAJB9; y la vía de la proteína quinasa del retículo endoplasmático similar a PKR (PERK), mediante el nivel de fosforilación del factor eucariótico de iniciación 2 α (eIF2α). Se demostró que la disminución en los niveles de KLF6 por 72 h conduce a una disminución en los niveles de BiP, calnexina e IRE1α, sin alterar la vía de PERK. El tratamiento con 1 nM de tapsigargina por 24 h, conocido estresor del RE, provoca el aumento esperado de BiP en células tratadas con el siRNA control. Mientras que el silenciamiento de KLF6 impide dicho aumento e inhibe la activación de la vía de IRE1α. Sin embargo, el RE es capaz de responder activando la vía de PERK. Este estudio revela por primera vez que KLF6 es un regulador de la UPR y permite postular que, al menos en parte, su rol en la placenta y en la transformación tumoral se asocia a su participación en la homeostasis del RE. Subsidiado por FONCyT y SECyT-UNC.