KLF6 ES UN FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN CLAVE EN EL PROCESO DE FUSIÓN CELULAR DEL TROFOBLASTO HUMANO

MIRANDA A.L.; ROJAS L; PANZETTA-DUTARIA GM; KOURDOVA L. T; GENTI-RAIMONDI S; RACCA A.; CRUZ DEL PUERTO M.M

Cordoba

Congreso; XXII jornadas de la Sociedad de Biología de Córdoba; 2019

El desarrollo y mantenimiento de la placenta requiere de la fusión de los citotrofoblastos vellosos (CTBv) para generar el sincitiotrofoblasto (STB), un epitelio continuo multinucleado donde tiene lugar el intercambio de nutrientes, gases y desechos entre la madre y el feto y la síntesis de proteínas críticas para el embarazo como las glicoproteínas específicas del embarazo y la hormona gonadotropina coriónica humana (hCG). El factor tipo krüppel-6 (KLF6) es un factor de transcripción cuya expresión se encuentra enriquecida en el tejido trofoblástico y su knock-out en ratones es letal, mostrando un desarrollo placentario defectuoso. Previamente, se demostró que KLF6 es necesario para la fusión de los CTBv así como también de la línea celular trofoblástica BeWo inducida por forskolina. En este trabajo se analizó si la expresión de KLF6 es suficiente para inducir el proceso de fusión y cuáles son los mecanismos dependientes de KLF6 implicados. Para ello, a partir de células BeWo se generaron líneas estables que expresan la proteína KLF6 de longitud completa (KLF6-BeWo), una mutante que carece del dominio acídico implicado en la actividad transcripcional (KLF6∆ac-BeWo), o células control establemente transformadas con el vector de expresión vacío (EV-BeWo). Estas líneas celulares se trataron o no con forskolina 30 µM y la fusión celular se analizó mediante inmunofluorescencia después de 72 h. Los niveles de transcriptos y/o proteína de diferentes marcadores de diferenciación y moléculas involucradas en este proceso como sincitina-1 (Syn-1), β-hCG, conexina-43 (Cx43), ABCG2, galectina-1 (Gal-1), GRP78 y p21 se midieron por qRT-PCR y western blot, respectivamente. La proliferación celular se evaluó mediante inmunomarcación con BrdU y recuento de células. Los resultados hallados demuestran que la sobreexpresión de KLF6 en células BeWo, no así la de KLF6∆ac, induce la formación de estructuras sincitiales aumentando el índice de fusión respecto a las células EV-BeWo. Además, la fusión celular inducida por forskolina se ve aumentada en la línea KLF6-BeWo, pero no en la línea KLF6∆ac-BeWo. Por otro lado, la expresión de los marcadores de diferenciación bioquímica y morfológica β-hCG y Syn-1, respectivamente, aumenta significativamente en células KLF6-BeWo, al igual que los niveles de Cx43, ABCG2, Gal-1, GRP78, y p21; mientras que la proliferación celular se encuentra disminuida. Estos resultados revelan que en células BeWo, KLF6 es capaz de disparar la fusión celular, modulando la expresión de genes y moléculas involucradas en este proceso y además participa en la disminución de la proliferación, evento asociado al aumento en la diferenciación celular. En su conjunto, los estudios realizados sugieren que KLF6 es necesario y suficiente para desencadenar la fusión, siendo un regulador maestro de la diferenciación celular en la vía sincitial. Subsidiado por FONCyT y SECyT-UNC.