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Recientemente se ha reportado la producción de vesículas extracelulares VEs por parte de diferentes tipos celulares y la implicancia de estas vesículas en la comunicación celular (1). Las VEs difieren en su tamaño y origen intracelular; se conocen como microvesículas (MVs) aquellas que poseen un tamaño entre 0,2 a 2,0 μm y surgen por brotación desde membrana plasmática y exosomas (Exo) las que se producen por fusión de los cuerpos multivesiculares con la membrana plasmática y miden de 0,03 a 0,1 μm (2). En el marco de esta problemática la microscopía electrónica de transmisión (MET) ha resultado una herramienta fundamental para demostrar la existencia de estas VEs, que por su tamaño no pueden resolverse con otro tipo de microscopía. Por lo tanto, el objetivo del trabajo fue caracterizar, a nivel de MET, las VEs producidas por células tumorales tiroideas en interacción con fibroblastos normales in vitro.Para ello, VEs derivadas del sobrenadante (MC) de cultivos de la línea celular TPC-1, de fibroblastos humanos (Fb) y de sus cocultivos (TPC-1+Fb) fueron purificadas por centrifugación y filtración diferencial, resuspendidas en p-formaldehído 2% y sometidas a un protocolo de tinción negativa (3). Brevemente, 5ul de suspensión se colocaron sobre grillas cubiertas con formvar y se postfijaron con Glutaraldehído 1%. Luego se lavaron con dH2O y contrastaron con acetato de uranilo/metilcelulosa. Además, se realizó la inmunomarcación a nivel de MET de CD147 (proteína que se expresa en la membrana plasmática de las células empleadas) la que se reveló con anticuerpo acoplado a partículas de oro coloidal de 15nm, previo a la tinción negativa. Finalmente, las grillas se observaron en el microscopio electrónico Zeiss LEO-906-E a 100k.Por medio de MET se logró observar las VEs presentes principalmente en los MC derivados de TPC-1+Fb (Fig 1C-F) y en menor medida en Fb (Fig 1A) y en TPC-1 (Fig 1B). En el análisis ultraestructural se observó la forma de ?copa? característica de las VEs y la doble membrana (fig 1 A-F). Asimismo, se determinó la presencia de dos poblaciones de vesículas de diferente tamaño coincidentes con las MVs una de 400-600nm (fig 1D-F) y otra de menor tamaño (100-200nm) (fig 1-A-C) las que se presentaron aisladas y/o agrupadas. El análisis morfológico se complementó con la inmunomarcación de CD147, demostrando la expresión de este receptor en la membrana de algunas vesículas (fig 1J-K)La técnica de tinción negativa para MET permitió la observación y caracterización morfológica de las VEs, siendo una técnica de elección considerando la rapidez en la preparación de la muestra y obtención de resultados. La realización de inmunomarcaciones a nivel ultraestructural contribuye a caracterizar la expresión y localización de proteínas marcadoras en las mismas. Por otro lado, esta metodología es compatible con la realización de análisis morfométricos a fin de establecer una cuantificación de las MVs considerando su número y tamaño. Por lo tanto, la MET resulta valiosa herramienta para evidenciar, confirmar y caracterizar la presencia de VEs.Bibiliografía:1-Tkach, M. et al. Cell, 2016. 164(6): p. 1226-32.2-Kowal, J., et al. Proc Natl Acad Sci U S A, 2016. 113(8): p. E968-773- Théry C, et al. Curr Protoc Cell Biol. 2006 Apr;Chapter 3:Unit 3.22.