Validation of laser-induced choroidal neovascularization (CNV) mouse model

SAABI N; RIDANO MAGALI E; LUNA JD; SUBIRADA CALDARONE PAULA; VAGLIENTI MV; MARIA CONSTANZA PAZ;; BARCELONA PF; MARQUEZ MA; MARQUEZ G; SANCHEZ MC,

Congreso; XII Congreso nacional de la Asociación de Investigación en Visión y Oftalmología (AIVO); 2018

Introducción. La degeneración macular relacionada con la edad (DMAE) en su forma neovascular es una de la principales causas de pérdida de la visión en adultos mayores de 55 años. En este estudio validamos un procedimiento establecido para la inducción de la neovascularización coroidea (CNV, por sus siglas en inglés) en ratones. Este procedimiento consiste en la perforación de la membrana de Bruch mediante fotocoagulación inducida por láser, reproduciendo la forma neovascular de DMAE.Objetivo. Caracterizar el proceso neovascular y su impacto en la funcionalidad retinal así como su perfil inflamatorio. Los trabajos previos realizados en nuestro laboratorio demostraron que tanto α2M y su receptor (LRP1) participan durante la neovascularización retinal, por lo que también nos centramos en la participación del sistema α2M/LRP1.Métodos. A ratones C57BL/6, 3-6 meses de edad, previamente anestesiados, se les practicaron cuatro lesiones de fotocoagulación por ojo con un láser de argón verde. Después de 7 días de realizadas las quemaduras por láser, analizamos las lesiones de neovascularización en flatmount de coroides-EPR mediante tinción con isolectina B4 utilizando microscopía confocal. Al mismo tiempo, mediante inmunotinción de marcadores específicos se caracterizaron las diferentes poblaciones celulares localizadas en el área de la lesión: CD105 (célula endotelial), NG2 (pericitos), F4/80 (microglía), así como la distribución del receptor LRP1 en estas células. Además, los niveles de proteína de α2M y LRP1 se analizaron por ensayos de WB y el perfil inflamatorio, evaluado por los niveles de IL1β, IL6 y TNFα mediante ensayo de qPCR. La funcionalidad de la retina se evaluó mediante ERG escotópico.Resultados. Pudimos estandarizar el tamaño de la lesión. Se observó una cantidad importante de célula endotelial y pericitos alrededor de la lesión. Las células de la microglía se localizaron en el área central y periférica de la lesión, mientras que α2M y LRP1 mostraron un aumento en el nivel de proteína acompañado de un gran patrón de expresión en células cercanas a la lesión; como así también se evidenciaron altos niveles de factores proinflamatorios y proangiogénicos. Las ondas a y b de ERG escotópico se redujeron (p