Evidencias del efecto directo de lipopolisacárido sobre células lactotropas en cultivo primario: presencia del receptor TLR-4

SABATINO M; GUTIERREZ S; MASCANFRONI ID; PETITI J; SOSA L; PELLIZAS CG; TORRES AI; DE PAUL AL

Mar del Plata

Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2009

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Previamente demostramos que lipopolisacárido (LPS) indujoproliferación de lactotropas de hipófisis hiperplásicas. En esta in-vestigación, se analizó la presencia de su receptor, TLR-4 y lacontribución de vía CD14/Akt/ERK1-2/NF-kB en la proliferación deactotropas inducida por LPS. Adenohipófisis de ratas macho adul-as tratadas con benzoato de estradiol por 60d fueron extraídas,cultivadas y las células tratadas con: LPS (2µg/ml), E2 (100nM),LPS+E2, por 30min. La expresión de TLR-4, CD14, p-Akt, p-ERK1/2 fue determinada por western blot (WB) en extractos citosólicos(EC); y NF-κB en extractos nucleares (EN) y EC, además de suocalización ultraestructural. La presencia TLR-4 y CD14 enactotropas se evaluó por citometría de flujo (CF) y pornmunofluorescencia (IF; Microscopía Confocal). Análisis estadís-tico: ANOVA-Fisher. LPS solo o combinado con E2 aumentósignificativamente la expresión de TLR-4 y CD14 en EC y activóAkt y ERK1/2. Además LPS incrementó los niveles de NF-kB enEN respecto a EC indicando su translocación al núcleo (p<0.05).El estímulo con E2 solo, no provocó cambios en la expresión deNF-kB. Por CF se detectó marca positiva para TLR-4 y CD14 enactotropas controles no permeabilizadas (21% y 73% respectiva-mente), indicando su localización en membrana plasmática. Nose detectaron cambios significativos en la expresión de TLR-4 ena superficie celular luego del tratamiento con LPS; sin embargohubo un aumento en el número de lactotropas positivas para CD14(17% vs control, p<0.05). La IF confirmó la presencia de célulasactotropas positivas para TLR-4 localizado tanto en membranaplasmática como citoplasma. Nuestros Resultados demuestran lapresencia del receptor de LPS: TLR-4 en membrana plasmáticade  lactotropas. Además, LPS activa la vía CD14/Akt/ERK1-2 pro-moviendo la translocación nuclear de NF-kB para finalmente in-ducir proliferación de lactotropas. La interacción LPS-TLR-4 re-vela la funcionalidad del receptor en células endócrinas.