Validation of laser-induced choroidal neovascularization (CNV) mouse model

BARCELONA PF; MARQUEZ AM; MARQUEZ GE; SANCHEZ, MC; SADDI TN; SUBIRADA PV; RIDANO, ME; LUNA JD; VAGLIENTI MV; PAZ MC

Cordoba

Congreso; AIVO 2018 (XIII Congreso Nacional de Investigación en Visión y Oftalmología; 2018

Introducción: La degeneración macular relacionada con la edad (AMD) en su forma neovascular es una de la principales causa de pérdida de la visión en adultos mayores de 55 años. En el presente estudio, validamos un procedimiento establecido para la inducción de la neovascularización coroidea (CNV) en ratones. Este procedimiento consiste en la perforación de la membrana de Bruch mediante fotocoagulación inducida por láser, reproduciendo la forma neovascular de AMD.Objetivo: Caracterizar el proceso neovascular y su impacto en la funcionalidad retinal así como su perfil inflamatorio. Trabajos previos realizados en nuestro laboratorio demostramos que tanto α2M y su receptor (LRP1) participan durante la NV retinal, por lo que también nos centramos en la participación del sistema α2M/LRP1.Métodos: Ratones C57BL/6, 3-6 meses de edad, previamente anestesiados se les practicaron cuatro lesiones de fotocoagulación por ojo, con un láser de argón verde. Después de 7 días de realizadas las quemadura por láser, analizamos la lesiones de NV en flatmount de coroides-RPE mediante tinción con isolectina B4 utilizando microscopía confocal. Al mismo tiempo, mediante inmunotincion de marcadores específicos se caracterizaron las diferentes poblaciones celulares localizadas en el área de la lesión: CD105 (célula endotelial), NG2 (pericitos), F4/80 (microglia), así como la distribución del receptor LRP1 en estas células. Además, niveles de proteína de α2M y LRP1 fueron analizaron por ensayos de WB y el perfil inflamatorio, evaluado por los niveles de IL1β, IL6 y TNFα mediante ensayo de qPCR. La funcionalidad de la retina se evaluó mediante ERG escotópio.Resultados: Pudimos estandarizar el tamaño de la lesión. Se observó una cantidad importante de célula endotelial y pericitos alrededor de la lesión. Mientras que las células de la microglia se localizaron en el área central y periférica de la lesión. Mientras que α2M y LRP1 mostraron un aumento en el nivel de proteína acompañado de un gran patrón de expresión en células cercanas a la lesión. Como así también se evidencio altos niveles de factores proinflamatorios y proangiogénicos. Las ondas a y b de ERG escotópicas se redujeron (p