Principios de la tecnica idila (intensity depletion inmuno-linked assay): aplicación en la determinación de gliadina?

MOTRICH, RUBEN D.; FRAIRE, JUAN C.; CORONADO, EDUARDO A.; MERCADAL, PABLO

Villa Carlos Paz

Congreso; NANOCORDOBA2017; 2017

IDILA (Intensity Depletion Inmuno-Linked Assay) es una novedosa técnica analitica desarrollada por nuestro grupo de investigación que se basa en combinar el cambio que experimenta la respuesta óptica de una dispersión coloidal de nanoesferas de plata (Ag NSs) funcionalizadas con estreptavidina y biotina (STV-biotina) en una relación molar (1:1:1) con la capacidad de reconocimiento biomolecular del anticuerpo especifico de interés. En una primera etapa se induce la aglomeración controlada de las Ag NSs (formación de dímeros de Ag NSs) en presencia de diferentes concentraciones de inmunoglobulina G Biotiniliada (Biot-IgG) que actúa como puente molecular entre las Ag NSs previamente funcionalizadas con (STV)-biotina. La formación de estas estructuras diméricas se evidencia experimentalmente por una disminución en la intensidad de extinción (absorción + dispersión). Una vez seleccionada la concentración óptima de Biot-IgG para favorecer la mayor formación de dímeros, en una segunda etapa, se efectúa el mismo experimento en presencia de un antígeno el cual inhibe la formación de estructuras diméricas y produce una variación en la intensidad de extinción en función de la concentración de antígeno[1]. Este hecho permite obtener una curva de calibración y cuantificar específicamente el analito de interés, para este ensayo se utilizo la técnica para la detección de gliadina. La gliadina es un complejo de proteínas presente en los cereales como trigo, avena, cebada, centeno y híbridos responsable de provocar la celiaquía, una enfermedad autoinmune que produce intolerancia al gluten (gliadina + gluteninas). Actualmente la gliadina se detecta mediante técnicas tipo ELISA[2]. En este trabajo aplicamos la técnica IDILA que presenta ventajas considerables con respecto a ELISA en cuanto al límite de detección, numero de pasos, cantidad de reactivos y costo. Además destacamos que la cuantificación y detección puede realizarse utilizando los mismos equipos que se requieren para la técnica ELISA, su implementación en laboratorios convencionales es directa y no requiere equipamiento adicional sofisticado.Para este caso los resultados obtenidos muestran que la técnica es capaz de cuantificar específicamente hasta 0.34 pg/mL de gliadina, los datos obtenidos fueron comparados con ensayos ELISA en muestras reales de alimentos.REFERENCIAS1. Juan C. Fraire, et al., Nanoscale, 2016, 8, 17169-171802.Garcıa. E, et al., European Journal of Gastroenterology & Hepatology 2005, Vol 17 No5.