VÍA AUTOFÁGICA EN EL MODELO MURINO DE RETINOPATÍA INDUCIDA POR OXÍGENO: UNA RESPUESTA DEPENDIENTE DE LA INTENSIDAD DEL ESTÍMULO

SUBIRADA, P. V.; VAGLIENTI, M.V.; SANCHEZ, M.C.; RIDANO, ME; BARCELONA, P.F.; PAZ, M.C.; CHIABRANDO, G. A.

Córdoba Capital

Jornada; Jornada Regional de la Asociación de Investigación en Visión y Oftalmología (AIVO); 2017

Asociacion de Investigacion en Vision y Oftalmología

Para mantener la homeostasis las células post mitóticas, como las neuronas, requieren sistemas de degradación eficientes que eliminen los desechos celulares. Uno de los mecanismos más importantes es la autofagia, una vía degradativa intracelular que elimina proteínas y organelas dañadas en vésiculas de doble membrana. Es conocido que el flujo autofágico puede variar ante estímulos nocivos, teniendo un impacto directo en la sobrevida celular. Dado que la hipoxia es uno de los agentes más nocivos presentes en la Retinopatía del Prematuro y la Retinopatía Diabética, en este trabajo evaluamos en un modelo murino de retinopatía inducida por oxígeno (OIR): a) los cambios en el flujo autofágico en las capas de la retina; y b) el rol de la autofagia en la supervivencia neuronal a través de la modulación farmacológica del flujo. Para este propósito, los ratones C57 / BL6 fueron expuestos al 75% de O2 desde el día postnatal (P) de 7 a 12, y luego fueron devueltos a condicientes ambientales (RA). Se usaron ratones de la misma edad mantenidos en RA como control. Los animales se sacrificaron en p12, P17 y P26. Por Western Blot y qPCR observamos variación en los niveles de LC3II y p62 a los distintos tiempos analizados. Ensayos de inmunofluorescencia en criocortes evidenciaron alteraciones en el flujo autofágico en las capas internas de la retina con niveles de p62 aumentados en el pico de neovascularización (P17). A fin de evaluar el segundo objetivo, en p12 se administró intraocularmente una dosis única de Spautin-1 (un inhibidor específico de la autofagia). Western blot de retinas neurales e inmunotinción mostraron que Spautin-1 incrementó los niveles de p62 y ligeramente LC3II, así como los niveles de glutamina sintasa en P17. Al mismo tiempo, la actividad electrorretinográfica (ERG) evidenció una disminución en la función de fotorreceptores e incremento en el número de células TUNEL positivas en la capa nuclear externa. A P26 no se observan diferencias significativas entre los controles y tratados con Spautin-1. El área avascular y de neovascularización no se modificaron con la inyección del inhibidor del flujo autofágico. Los resultados sugieren que en la capa nuclear externa, la autofagia se conserva durante la hipoxia y constituye un mecanismo de supervivencia. Mientras que en las capas internas, donde las células se ven severamente afectadas por la hipoxia, es probable que el flujo autofágico esté disminuido.