Estudio in vitro de la estimulación simultánea de vías metabólicas e inflamatorias en macrófagos y adipocitos

PORPORATTO CARINA; NEO SABRINA; CANALI M MAGDALENA; ICELY PAULA A; CORREA, SILVIA G

La Falda, Córdoba

Congreso; LVI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2008

Sociedad Agentina de Inmunología

La coordinación entre las vías metabólicas e inmunes se evidencia por la superposición en la actividad biológica y funcional que los adipositos y macrófagos desarrollan en la obesidad. Existe una similar expresión de genes en ambos tipos celulares, capacidad de almacenar lípidos en macrófagos y actividad fagocítica en los adipositos. La actividad concertada de estas células contribuiría a la producción de citoquinas y mediadores inflamatorios. Para evaluar los efectos de la estimulación simultánea de vías metabólicas e inflamatorias en un sistema experimental in vitro, utilizamos células de la línea RAW 264.7 (macrófagos) y de la línea NIH 3T3 diferenciadas con insulina, dexametasona y 3-isobutil-1-metil-xantina (modelo de adiposito) cultivadas con baja (5 mM) o alta (25 mM) concentración de glucosa, que favorece =as alteraciones metabólicas. Las células se estimularon con medio de cultivo, 2 ug/ml LPS, 10 ug/ml quitosano (Q), 10 ug/ml PPD durante 24 a 48 hs. La morfología celular se evaluó en preparados de citocentrífuga coloreados con Red Oil. En los sobrenadantes se determinó la producción de ON (método colorimétrico) y en el extracto celular la actividad de arginasa (método colorimétrico). De las muestras estimuladas con LPS se obtuvo RNA total y se determinó la expresión del RNAm de los receptores nucleares PPAR (expresión temprana) y LXR (expresión intermedia) que coordinan distintos aspectos del metabolismo lipídico, almacenamiento y transporte (RT-PCR). Las líneas celulares mostraron similar actividad de arginasa a 5 y 25 mM glucosa (F=2,28 p=0.08), aunque observamos diferencias entre ambas con LPS y Q en glucosa 25 mM (p<0.05). La producción de ON por NIH 3T3 estuvo significantemente disminuida con LPS y Q respecto a RAW (p<0.05), aunque ambas líneas mostraron menor respuesta a bajas concentraciones de glucosa 5 mM (p<0.05). La expresión basal o post estímulo del receptor PPAR fue similar a 5 y 25 mM =lucosa en ambas líneas en tanto que hubo diferencias significativas en la expresión basal y postestímulo del RNAm para el LXR entre ambas líneas =p<0.05) a altas concentraciones de glucosa. Estos resultados muestran la mayor respuesta =e los macrófagos comparado con los adipositos ante los distintos estímulos, aunque a altas concentraciones de glucosa el perfil de ambas líneas es más reactivo, con expresión selectiva de marcadores de la alteración metabólica-inflamatoria.