SOBRENADANTE DE CÉLULAS TUMORALES ACTIVADAS IN VITRO CON LPS PROMUEVE LA MADURACIÓN DE CÉLULAS DENDRÍTICAS DERIVADAS DE ANIMALES DEFICIENTES EN TLR4

V. ANDREANI; M. I. CRESPO; G. MORÓN; S. DI GENARO; V. RIVERO; M. MACCIONI

La Falda. Argentina

Congreso; LVI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2008

Sociedad Argentina de Inmunología

Cuando células de la línea B16 de melanoma murino son activadas in vitro vía el receptor TLR4 por 48 h (LPS 1 mg/ml), se inhibe el posterior crecimiento del tumor in vivo. Esta inhibición no es debida a un efecto directo de la señalización vía TLR4 sobre la proliferación o apoptosis de la célula tumoral, no se observa en ratones atímicos nude, y permanece en ratones deficientes en TLR4 (TLR4lps-del), indicando que el sistema inmune está involucrado en este fenómeno, y que depende de la presencia de TLR4 en la célula tumoral y no en células presentadoras de antígeno del huésped. Nuestra hipótesis es que la activación vía TLR4 in vitro de las células tumorales induciría cambios fenotípicos y/o funcionales en éstas, pudiendo alterar significativamente el estado de maduración de células dendríticas (CDs) presentes en el sitio de inoculación, cambiando así el tipo de respuesta inmune que se monta frente al tumor. Para evaluar esta hipótesis, CDs derivadas de médula ósea de animales TLR4lps-del fueron cultivadas en presencia o ausencia de sobrenadante (SN) de células B16 estimuladas con LPS (SN B16+LPS) o sin estimular (SN B16). La expresión de moléculas MHC Clase II y CD86 en células CD11c+ se analizó posteriormente por Citometría de Flujo. El porcentaje de expresión de CD86 en células CD11c+ incubadas con medio sólo fue de 8,37%, observándose valores similares con la estimulación con LPS (7,39%). Este valor se incrementó a un 15,6% al agregar CpG al medio de cultivo, y se redujo a niveles basales al incubar las CDs con SN B16 (7,3%). Esta disminución pudo ser restituida a valores cercanos a la estimulación con CpG sólo, cuando se incubaron las CDs con CpG conjuntamente con el SN B16+LPS (12%), generándose así una reducción en la inhibición observada con el SN de células tumorales no activadas. El rol in vivo de las CDs en el desarrollo tumoral fue evaluado indirectamente al inyectar células B16 estimuladas in vitro con LPS (1 mg/ml) o sin estimular, en ratones C57BL6/IL12p40 ko. A diferencia de lo observado en ratones wild type o TLR4lps-del, ambos grupos experimentales presentaron el mismo patrón de crecimiento tumoral, indicando la importancia de la función de citoquinas secretadas por CDs en la respuesta antitumoral de este modelo.